[发明专利]一种黄瓜胚保存的方法

说明书

本发明涉及黄瓜组织培养技术领域，尤其涉及一种黄瓜胚保存的方法，其保存黄瓜胚性愈伤组织和胚状体一定时间后，重新恢复生长再生为植株。其保存方法为：将黄瓜胚性愈伤组织和胚状体在保存培养基上进行培养，保存培养基以MS培养基为基础，还需要添加60g/L蔗糖、1.5mg/L 2,4‑D和7％琼脂，PH为5.8，本发明筛选出了特定的培养基，在该培养基上，黄瓜胚性愈伤组织和胚状体不易褐变，且能生长再生为正常小植株。一般黄瓜胚性愈伤组织和胚状体会持续发育生长，逐渐老化至死亡，本发明通过调节蔗糖的浓度比例，阻止了组织老化，可保存胚性愈伤组织和胚状体至少60天，能有效保持胚性愈伤组织的胚性发育能力，可为黄瓜遗传转化持续提供受体材料。

技术领域

本发明涉及黄瓜组织培养技术领域，尤其涉及一种黄瓜胚保存的方法，其保存黄瓜胚性愈伤组织和胚状体一定时间后，重新恢复生长再生为植株。

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus L.)是世界上普遍栽培的重要蔬菜之一，黄瓜的清脆口感深受消费者的喜爱。仅利用常规育种无法满足人们对于黄瓜品种、品质方面的需求，

目前利用基因工程技术开展黄瓜分子育种正越来越受到黄瓜育种工作者的重视。进行优良基因的遗传转化是改善其品种、品质的有效途径，易于再生和转化的受体材料是进行黄瓜基因工程育种的前提和基础。由于利用器官发生途径进行黄瓜遗传转化容易形成嵌合体且再生效率不高，因此，目前广泛应用胚状体开展黄瓜遗传转化研究。在黄瓜胚状体诱导再生过程中，外植体脱分化诱导出胚性愈伤组织，胚性愈伤组织发育形成胚状体。胚性愈伤组织和胚状体都可以作为黄瓜遗传转化的受体材料。黄瓜遗传转化需要大量的受体材料。但黄瓜胚状体诱导受基因型等影响较大，诱导效率低且胚性保持困难，极大限制了黄瓜生物技术育种的进程。胚性愈伤组织和胚状体不及时作为受体材料进行遗传转化的话，外植体会继续褐化、老化或者凋亡。重复培养消耗人力，浪费时间。因此，继续寻找简便高效的保持和扩繁黄瓜胚性愈伤组织和胚状体的方法对开展黄瓜遗传转化研究，显得尤为重要和迫切。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种黄瓜胚保存的方法，以解决现有技术存在的如何长期保存黄瓜体细胞胚发生过程中的胚性愈伤组织和胚状体。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种黄瓜胚保存的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：培养黄瓜无菌苗，切取无菌苗的子叶节作为外植体，接种到胚性愈伤组织和胚状体诱导培养基上，得到黄瓜的胚性愈伤组织和胚状体；

步骤2：取培养好的胚性愈伤组织和胚状体，接种到保存培养基上，进行保存培养；

步骤3：将保存60天后的胚性愈伤组织转移到恢复培养基上，得到恢复生长的胚性愈伤组织和胚状体；

步骤4：将得到的胚性愈伤组织和胚状体接种到MS培养基(MS+30g/L蔗糖+7％琼脂)中，进行培养，使其萌发，获得小植株。

上述步骤1中子叶节获得的具体方法为：将消毒杀菌后的种子接种至MS培养基(MS+30g/L蔗糖+7％琼脂)上，待子叶生长到下胚轴已伸长，种皮脱落，子叶尚未展开呈闭合状态的时候，切除子叶上部的二分之一，从中间纵向剖开，保留一点下胚轴，除去生长点，获得子叶节。

上述步骤1和步骤3中的诱导培养基和恢复培养基均为：MS+30g/L蔗糖+7％琼脂+1.5mg/L 2,4-D，PH值5.8。

上述步骤2中的保存培养基为：MS+60g/L蔗糖+7％琼脂+1.5mg/L2,4-D，PH值5.8。

上述的MS培养基为MS+30g/L蔗糖+7％琼脂。

上述培养条件均为23℃，光照时间均为16小时/天，光照强度均为2000Lx。

与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下：