[发明专利]一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用

说明书

本发明提供了一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用，所述检测新型冠状病毒的引物探针组合包括特异性扩增并检测2019‑nCoV的ORF1ab基因、核壳蛋白N基因和刺突蛋白S基因N501Y突变位点的特异性引物对和探针。本发明还提供了一种检测新型冠状病毒的试剂盒及其以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法。本发明所述检测新型冠状病毒的引物探针组合具有良好的特异性与灵敏度，配合优化后的检测体系，可以对待测样本进行快速准确的检测，并可以对整个实验流程进行监控，降低假阳性以及假阴性检测结果的出现概率，具有重要的意义。

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用。

背景技术

2019新型冠状病毒（2019-nCoV/SARS-CoV-2）是引发新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的病原体，其具有潜伏期长、传染性强的特点，危害人们的身体健康，影响了社会的发展，造成了巨大的损失。

目前，针对新型冠状病毒的检测方法主要包括测序法、qPCR法及胶体金法。测序检测需要配合测序专用的仪器进行使用，适用性较差，且对操作人员的技术水平要求较高。qPCR法是目前应用最广的检测方法，但受样本采集部位、采集方式、采集量、运输与储存及检测人员的操作水平等因素的影响，可能存在一定的误差，仍有可以改进的空间。胶体金法属于抗体检测，检测患者的血清中是否含有特异性抗体，特异性高，准确性好，但患者从感染病毒到体内生成抗体需要的时间较长，通常只能检测出感染时间较长的患者，对处于潜伏期患者的检测效果不佳，且不利于患者的管控。

CN111879939A公开了一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，所述试剂盒包括卡盒、IgM检测试纸条和稀释液；所述IgM检测试纸条包括顺次搭接在PVC板上的样品垫、IgM检测结合垫、层析膜和吸水纸；所述IgM检测结合垫包被有胶体金颗粒标记羊抗人IgM单克隆抗体和胶体金颗粒标记新型冠状病毒重组蛋白；所述层析膜包被有鼠抗人μ链单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体。该试剂盒使用方便，检测准确率高，特异性好，但同样存在只能检测出感染时间较长的患者的弊端。

针对新型冠状病毒的检测，目前普遍存在对感染初期患者的检测灵敏度低、准确性差的问题。因此，如何提供一种新型冠状病毒的检测方法，可以提高检测反应的灵敏度与精准度，并可以对感染初期的病人进行及时的诊断与治疗，已成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用，所述引物探针组合具有良好的灵敏度，最低检测限度可达1×10³ copies/mL，特异性好，检测结果准确，具有极高的应用价值。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种检测新型冠状病毒的引物探针组合，所述检测新型冠状病毒的引物探针组合包括特异性扩增并检测2019-nCoV的ORF1ab基因、核壳蛋白N基因和刺突蛋白S基因N501Y突变位点的特异性引物对和探针；

扩增所述ORF1ab基因的特异性引物对包括SEQ ID No.1~2所示的核苷酸序列，检测所述ORF1ab基因的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；

扩增所述核壳蛋白N基因的特异性引物对包括SEQ ID No.4~5所示的核苷酸序列，检测所述核壳蛋白N基因的探针包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；

扩增所述刺突蛋白S基因N501Y突变位点的特异性引物对包括SEQ ID No.7~8所示的核苷酸序列，检测所述刺突蛋白S基因N501Y突变位点的探针包括SEQ ID No.9所示的核苷酸序列。

SEQ ID No.1：ACCGCAAGGTTCTTCTTCGT；

SEQ ID No.2：CAAGCTCGTCGCCTAAGTCA；