[发明专利]转基因马铃薯AM04-1020特异性实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了AM04‑1020转基因马铃薯特异性实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒。本发明针对AM04‑1020转基因马铃薯特异性序列设计引物和探针，建立AM04‑1020转基因马铃薯特异性实时荧光PCR检测方法，具有特异性好、灵敏度高、可重复性良好等优点，扩增效率为94.39％，最低定量检测下限为0.025％。有效的解决了现有技术中无AM04‑1020转基因马铃薯特异性精准定量检测技术的问题，该方法可应用于进出境口岸检验检疫、国内农业产品食品监管的AM04‑1020转基因马铃薯及其产品的检测。

技术领域

本发明属于转基因产品检测领域，具体涉及转基因马铃薯AM04-1020实时荧光PCR检测引物探针、方法和试剂盒。

背景技术

目前国外上市的转基因马铃薯约47种(ISSSA数据)，目前国外上市的品系中，仅欧盟建立的EH92-527-1品系品系特异性检测方法：Savini C.,Foti N.,Mazzara M.,CharlesDelobel C.,Van Den Eede G.；Event-specific Method for the Quantification ofEvent EH92-527-1Potato Using Real-time PCR-Validation Report and Protocol-SAMpling and DNA Extraction of Potato Online Publication(2006)；此外，高宏伟等建立的一种未上市马铃薯品系av43-6-g7检测方法：(Gao H,Yu X,Deng T,et al.Event-specific detection of transgenic potato AV43-6-G7 using real-time and digitalPCR methods[J].Bmc Biotechnology,2016,16(1):74.)。尚未有马铃薯其他转基因品系的品系特异性实时荧光PCR检测方法的文献。

支链淀粉马铃薯AM04-1020是由马铃薯品种库拉斯(Kuras)采用RNA干扰技术研发的降低颗粒结合的淀粉合酶的表达转基因马铃薯品系。AM04-1020马铃薯显著降低了直链淀粉的水平，使支链淀粉含大于98％；同时其转入编码乙酰羟酸合酶的csr1-2基因(咪唑啉酮类除草剂耐受)用作组织培养过程中的筛选基因。

与另一种转基因马铃薯品系EH92-527-1通过反义技术单独下调粒状淀粉合酶(BGSS) (WO 92/11376，EP0563 189)而产生支链淀粉型淀粉不同，AM04-1020通过基因遗传工程方法，通过同时RNA干扰下调三个可溶性淀粉合酶基因(granule-bound starchsynthase gene,SS)使直链淀粉含量降低生产支链淀粉型淀粉，并且AM04-1020转基因品种的峰值粘度(淀粉的粘度)降至野生型马铃薯品种的70％，而EH92-527-1品系与非转基因马铃薯流行品种相比，峰值粘度不变。

目前对转基因产品多数国家均采用相应的标识管理制度，标识管理制度的建立和实施依赖于有效准确的检测鉴定技术。针对转基因马铃薯AM04-1020构建特异性实时PCR检测方法。

目前欧盟等其他国家和地区均尚无转基因马铃薯AM04-1020特异性实时荧光PCR检测方法。

发明内容：

本发明的目的是提供一种特异性好、灵敏度高、稳定性强，快速准确鉴别转基因马铃薯 AM04-1020特异性实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒。

本发明的第一个目的是提供一种转基因马铃薯AM04-1020特异性实时荧光PCR检测引物组，包括检测引物和检测探针：

所述的检测引物如下所示：

AM04-1020-5F2：5’-ATTTTTCATCCACATTTAAATTTATTAG-3’(如SEQ ID NO.1所示)；