[发明专利]牛源大肠杆菌检测引物探针组合、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了牛源大肠杆菌检测引物探针组合、试剂盒及应用。属于病原菌检测技术领域。牛源大肠杆菌检测引物探针组合包括用于检测菌毛抗原F5基因的引物探针和用于检测菌毛抗原F41基因的引物探针。利用本发明可牛源大肠杆菌检测引物探针组合同时实现大肠杆菌菌毛抗原F5基因和检测菌毛抗原F41基因的检测，检测灵敏度高、特异性强、重复性好，适于推广应用。

技术领域

本发明属于病原菌检测技术领域，具体涉及牛源大肠杆菌检测引物探针组合、试剂盒及应用。

背景技术

致病性大肠杆菌可引起牛及其他动物的水样腹泻，严重情况甚至导致病畜死亡，造成巨大的经济损失；在致病性大肠杆菌侵染病畜的过程中，菌毛能够黏附牛小肠绒毛特异性受体上，释放肠道毒素，并且可保护致病性大肠杆菌免受肠道消化酶的影响。致病性大肠杆菌具有多种菌毛类型，其中，F5、F41较为流行，鉴定菌毛类型有助于更有针对性地对病畜感染的大肠杆菌进行防治。

目前，研究人员已根据F5、F41研究出利用PCR对大肠杆菌的鉴定方法，然而，针对不同的菌毛类型，需要分别进行PCR检测，并且检测灵敏度低、特异性差。

因此，如何提供一种针对于F5、F41检测灵敏度高、特异性强的牛源大肠杆菌检测产品是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明公开了牛源大肠杆菌检测引物探针组合、试剂盒及应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

牛源大肠杆菌检测引物探针组合，

包括用于检测菌毛抗原F5基因的引物探针和用于检测菌毛抗原F41基因的引物探针；

用于检测菌毛抗原F5基因的引物探针包括：

上游引物Forward F5：5’-GGTCAATGGTAATCGTACATCAAC-3’，SEQ ID NO:1；

下游引物Reverse F5：5’-ACTGTTCATAGAACCAGACCAG-3’，SEQ ID NO:2；

探针Probe F5：5’CY5-CTTGGGCAGGCTGCTATTAGTGGTCATG-3’BHQ3，SEQ ID NO:3；

用于检测菌毛抗原F41基因的引物探针包括：

上游引物Forward F41：5’-TACTGAGCTAGGGACTCTT-3’，SEQ ID NO:4；

下游引物Reverse F41：5’-CTGGATTAACAAGCCCTTCA-3’，SEQ ID NO:5；

探针Probe F41：5’ROX-TCATTTGGTGCGGCAGTTGCAACTATT-3’BHQ2，SEQ ID NO:6。

上述牛源大肠杆菌检测引物探针组合在制备检测牛源大肠杆菌的产品中的应用。

牛源大肠杆菌检测试剂盒，包括上述牛源大肠杆菌检测引物探针组合。

上述牛源大肠杆菌检测试剂盒使用时的检测体系为25μL：

Premix Ex Taq 12.5μL，

10μM Forward F50.2μL，

10μM Reverse F50.2μL，

10μM Probe F50.6μL，

10μM Forward F411μL，

10μM Reverse F411μL，

10μM Probe F410.2μL，