[发明专利]一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1以及试剂R2，其中试剂R1包括50‑100mol/L的缓冲液、0.1‑1mol/L的无机盐、10‑40g/L的加速剂、2‑10g/L的表面活性剂以及0.5‑1.5g/L的防腐剂；试剂R2包括：10‑80mmol/L缓冲液、0.1‑1mol/L无机盐、20‑80g/L封闭蛋白以及30‑80ml/L包被有IgG4单克隆抗体的胶乳微球，胶乳微球的粒径为20‑50nm，包被有IgG4单克隆抗体胶乳微球的制备过程包括：在胶乳微球封闭完成后，向其中回添0.2‑0.5mg的IgG4单克隆抗体。本发明通过选用极低粒径微球，以及在包被有IgG4单克隆抗体胶乳微球的制备过程中回添微量抗体的方法，增加了胶乳微球与抗体的标记效率，显著提升了试剂的抗HOOK能力，使试剂的线性范围达到0.04‑7.0g/L。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒及其制备方法。

背景技术

免疫球蛋白G(immunoglobulin G，Ig G)是一种由浆细胞产生在血液中含量最高的免疫球蛋白，约占免疫球蛋白总量的75.0％-80.0％，在细胞免疫及体液免疫中均发挥重要的作用。IgG由于重链恒定域的序列不同而分为不同亚型，例如IgGl、IgG2、IgG3以及IgG4四种亚型，IgG4(immunoglobulin G4，IgG4)属于IgG中含量最低的一个亚型，约占血清总IgG含量的0.8％-11.7％，血清IgG4在人体内的正常含量为0.08-1.4g/L，平均为0.56g/L，其半衰期为21天。

免疫球蛋白G4相关疾病(IgG4-related disease，IgG4-RD)是一种新近发现的系统性自身免疫性疾病，其特征性改变为一个或多个器官局灶弥散性炎性细胞浸润和/或脏器肿大，表现为血清IgG4水平升高，以及典型的组织病理学改变-淋巴样浆细胞浸润、席纹状间质纤维化和闭塞性静脉炎。IgG4-RD可以同时或先后累及单个器官或多个器官，从而表现为不同的临床症候群：主要包括自身免疫性胰腺炎(AIP)、米库利奇病(Mikuliczdisease，MD)、腹膜后纤维化(retroperitoneal fibrosis，RPF)、硬化性胆管炎、肾小球膜性病变及小管间质性肾炎(tubulointerstitial nephritis，TIN)等疾病。

目前，IgG4的检测手段主要为：酶联免疫法(ELISA)以及免疫比浊法，而ELISA由于其需要进行手工操作且耗时较长，在临床上尚未大规模使用。普通比浊法一般直接使用抗血清或多抗制备R2试剂，但抗血清或多抗中存在大量非特异性蛋白，且IgGl、IgG2、IgG3和IgG4四种亚型之间差异较小，采用多抗容易发生交叉反应，难以特异性识别IgG4。

发明内容

本发明提供一种定量免疫球蛋白G4的试剂盒，通过选用极低粒径的胶乳微球，以及优化胶乳微球的标记过程：在胶乳微球标记过程中回添微量IgG4单克隆抗体的方法，增加了IgG4单克隆抗体与胶乳微球的标记效率，显著提升了试剂的检测性能，尤其是试剂的抗HOOK能力。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术手段：一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，包括试剂R2，其特征在于：所述试剂R2包括10-80mmol/L缓冲液、0.1-1mol/L无机盐、20-80g/L封闭蛋白以及30-80ml/L包被有IgG4单克隆抗体的胶乳微球，所述胶乳微球的粒径为20-50nm。

优选地，还包括试剂R1，所述试剂R1包括：50-100mol/L的缓冲液、0.1-1mol/L的无机盐、10-40g/L的加速剂、2-10g/L的表面活性剂以及0.5-1.5g/L的防腐剂。

优选地，在试剂R2中：所述缓冲液选自MOPS、Tris、硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为硼酸缓冲液或Tris缓冲液；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述封闭蛋白选自BSA或酪蛋白中的至少一种。