[发明专利]一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，包括试剂R2，其特征在于：所述试剂R2包括10-80mmol/L缓冲液、0.1-1mol/L无机盐、20-80g/L封闭蛋白以及30-80ml/L包被有IgG4单克隆抗体的胶乳微球，所述胶乳微球的粒径为20-50nm。

2.根据权利要求1所述一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，其特征在于：还包括试剂R1，所述试剂R1包括：50-100mol/L的缓冲液、0.1-1mol/L的无机盐、10-40g/L的加速剂、2-10g/L的表面活性剂以及0.5-1.5g/L的防腐剂。

3.根据权利要求1所述的一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，其特征在于，在试剂R2中：所述缓冲液选自MOPS、Tris、硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为硼酸缓冲液或Tris缓冲液；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述封闭蛋白选自BSA或酪蛋白中的至少一种。

4.根据权利要求2所述的一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，其特征在于，在试剂R1中：所述缓冲液选自MOPS、柠檬酸钠缓冲液、Tris或MES中的至少一种，所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述加速剂选自PEG8000、PEG6000或PEG20000中的至少一种；所述表面活性剂选自TX-100、Brij58、A90或Tween-20中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或PC3000中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的一种测定免疫球蛋白G4的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的PH为6.0-8.0；所述试剂R2的PH为6.0-8.0。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的测定免疫球蛋白G4试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)试剂R1的制备

试剂R1按照下述配方进行配置：

50-100mol/L的缓冲液、0.1-1mol/L的无机盐、10-40g/L的加速剂、2-10g/L的表面活性剂以及0.5-1.5g/L的防腐剂；

所述缓冲液选自MOPS、柠檬酸钠缓冲液、Tris或MES中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述加速剂选自PEG8000、PEG6000或PEG20000中的至少一种；所述表面活性剂选自TX-100、Brij58、A90或Tween-20中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或PC3000中的至少一种；

(2)试剂R2的制备

将胶乳微球加入标记缓冲液中，搅拌均匀；随后向其中加入NHS/EDC活化剂活化，搅拌均匀；向活化的胶乳微球溶液中加入IgG4单克隆抗体，搅拌均匀后孵育6-14h；加入1％封闭蛋白，孵育1h后，向制备好的试剂中回添IgG4单克隆抗体，混匀，最终放入烘箱中老化3天。

所述缓冲液选自MOPS、Tris、硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种；优选为硼酸缓冲液或Tris缓冲液；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述封闭蛋白选自BSA或酪蛋白中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的一种测定免疫球蛋白G4试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胶乳微球的粒径为20-50nm。

8.根据权利要求7所述的一种测定免疫球蛋白G4试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，向制备好的试剂中回添IgG4单克隆抗体的含量为0.2-0.5mg。

9.根据权利要求8所述的一种测定免疫球蛋白G4试剂盒的制备方法，其特征在于，所述活化剂采用EDC/NHS，所述NHS与EDC以及胶乳微球的质量比为：1∶(20-40)，所述IgG4单克隆抗体与胶乳微球的质量比为1∶(0.5-1)。

10.根据权利要求6-9所述的一种测定免疫球蛋白G4试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂R2中包被有IgG4单克隆抗体的胶乳颗粒的含量为20-30％。