[发明专利]一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体及其制备的方法和应用。所述单克隆抗体包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:6所示。本发明的特异性针对非洲猪瘟病毒的全猪源单克隆抗体，保留了轻链、重链可变区的天然配对，具有基因多样性好、全猪源、抗体亲和力好、特异性强等优势，可在真核表达系统中进行高效表达。本发明为开发非洲猪瘟病毒诊断试剂盒提供了新型原材料，也为研制全猪源单克隆抗体的预防与治疗性药物提供了新的技术支持。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体以及利用高通量单个B细胞PCR技术制备该单克隆抗体的方法。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)引起猪的一种急性、高度接触性传染病，其病程短、病死率可达100％。世界卫生组织(OIE)将其列为法定报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。ASF于1921年首次在肯尼亚发现，2018年8月传入我国，随后迅速蔓延至我国多个省市，对我国养猪业的发展造成了巨大的经济损失。到目前为止，尚无有效的商品化疫苗防控ASF，短期内依靠早期诊断与区域化防控管理来进行防制。

ASFV具有庞大的基因组结构和复杂的免疫逃逸机制，目前仍有很多蛋白的功能未知。为了深入研究ASFV编码蛋白在病毒感染中发挥的作用，故需要开发更多能够识别这些蛋白的抗体，深入探究这些蛋白与抗体间相互作用，从而挖掘关键的抗原表位，实现对ASFV感染的准确诊断，优化疫苗设计，为ASF防治提供新方向和新思路。

公开号为CN112592401A和CN112500478A的发明专利分别公开了一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH-VLλ11、VH-VLλ6，以及其制备方法，虽然VH-VLλ11和VH-VLλ6均为非洲猪瘟病毒抗体，但该抗体均为单链抗体，单链抗体仅包括重链可变区和轻链可变区，不包括恒定区。

高通量单个B细胞PCR抗体技术是近年来发展起来的一种新型的抗体制备技术。该技术从单个B细胞扩增抗体基因，并进行体外克隆表达，此方法获得的抗体保留了轻重链可变区的天然配对，具有效率高、全天然源性、基因多样性更丰富等优势。

发明内容

本发明提出了一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体以及利用高通量单个B细胞PCR技术制备该单克隆抗体的方法。

本发明第一方面提供一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:1或SEQ ID NO:5所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:6所示。重链恒定区、Kappa和Lambda轻链恒定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示。

本发明第二方面提供一种编码所述全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体的DNA片段。

编码全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体的重链可变区的DNA片段如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7所示，编码全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体的轻链可变区的DNA片段如SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:8所示。

本发明第三方面提供一种重组表达载体，所述的重组表达载体包含有所述的DNA片段。

本发明第四方面提供一种宿主细胞，所述的宿主细胞包含有所述的重组表达载体。

上述全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：