[发明专利]T-ALL来源诱导多能干细胞模型及其构建方法

说明书

本发明公开了一种T‑ALL来源诱导多能干细胞的制备方法，包括以下步骤：a、将携带KOS、c‑Myc和Klf4基因的病毒载体按照MOI比值为(4.5～5.5)：(4.5～5.5)：(2.5～3.5)的量转染入源自T‑ALL生物体的外周血单个核细胞中；b、将步骤a得到的转染后的细胞进行培养。本发明还公开了一种诱导多能干细胞。

技术领域

本发明涉及T-ALL研究模型技术领域，特别是涉及诱导多能干细胞及其构建方法。

背景技术

急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种常见的血液系统恶性肿瘤，由造血干细胞的异常增殖和分化引起。T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)是由T细胞前体的基因改变引起的，导致胸腺、血液、骨髓和外周组织中T细胞的发育停滞和聚集。多年来，转录因子表达失调、CDKN2A/2B细胞周期调节因子的损伤和NOTCH1信号的过度激活在T-ALL的发病机制中起着重要作用。尽管T-ALL的诊断和治疗已经取得了很大的进展，但耐药、复发等难治性T-ALL的治疗仍然是临床亟待解决的问题，因此构建合适的T-ALL研究模型对于T-ALL的临床研究具有重要的作用。

发明内容

基于此，有必要提供一种T-ALL来源诱导多能干细胞及其构建方法，提供T-ALL的研究模型。

一种T-ALL来源诱导多能干细胞的制备方法，包括以下步骤：

a、将携带KOS、c-Myc和Klf4基因的病毒载体按照MOI比值为(4.5～5.5)：(4.5～5.5)：(2.5～3.5)的量转染入源自T-ALL生物体的外周血单个核细胞中；

b、将步骤a得到的转染后的细胞进行培养。

在其中一些实施例中，所述病毒载体选自仙台病毒。

在其中一些实施例中，步骤a中，转染之前，包括将源自T-ALL生物体的外周血单个核细胞悬浮在造血干细胞无血清培养基中，接种于培养板上，培养66小时～78小时的步骤。

在其中一些实施例中，所述造血干细胞无血清培养基含有L-谷氨酰胺、SCF、FLT3LG、IL-3和IL-6。

在其中一些实施例中，在所述造血干细胞无血清培养基中，L-谷氨酰胺的质量百分数为0.8％～1.2％，SCF为80ng/mL～120ng/mL，FLT3LG为80ng/mL～120ng/mL、IL-3为15ng/mL～25ng/mL，IL-6为8ng/mL～12ng/mL。

在其中一些实施例中，步骤b包括：将步骤a得到的转染后的细胞先在无层粘连蛋白的培养板中培养66小时～78小时；经离心、复悬之后，转移入包被层粘连蛋白的培养板上进行培养。

在其中一些实施例中，所述在包被层粘连蛋白的培养板上进行培养包括在缺乏细胞因子的培养基中进行培养。

在其中一些实施例中，所述在包被层粘连蛋白的培养板上进行培养包括在SCF≤60ng/mL，FLT3LG≤60ng/mL、IL-3为12.5ng/mL，IL-6为6ng/mL的无血清培养基中进行培养。

在其中一些实施例中，步骤b包括：在包被层粘连蛋白的培养板上培养20小时～28小时后，在胚胎干细胞培养基中进行培养。

所述的诱导多能干细胞的制备方法制备得到的诱导多能干细胞。

本发明对T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)体细胞进行重编程获得诱导性多能干细胞(iPSCs)。结果表明T-ALL来源iPSCs具有与T-ALL相同的突变，可作为T-ALL疾病研究模型。

附图说明

图1为本发明一实施例的PBMC细胞重编程为iPSC过程的显微拍摄图(40×)；

图2为本发明一实施例的iPSC克隆传代10次后的显微拍摄图(40×)；