[发明专利]一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法

说明书

本发明申请属于虎舌红植物组织培养技术领域，具体公开了一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，该方法包括成熟果实的获取、种子的预处理、种子消毒、胚的获取、愈伤组织诱导、分化和不定芽增殖培养。在超净工作台上，成熟种子经消毒处理，取出胚接种到培养基上，胚污染率为0；培养60～80天，愈伤组织诱导率为90％，愈伤组织分化率为48％；将分化的不定芽接种到增殖培养基中继续培养45～55天，不定芽增殖率可达1600％以上。本试验为虎舌红培育提供了一种高效的繁殖方法，以成熟胚为外植体，污染率低、诱导率高，培育周期短，不定芽数量多，为虎舌红繁殖、新品种开发和优良品种的保护奠定了基础。

技术领域

本发明属于虎舌红植物组织培养技术领域，具体公开了一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法。

背景技术

虎舌红(Ardisia mamillata Hance)为紫金牛科，紫金牛属矮小灌木，原产中国，花期6～8月，叶片红色或绿色，全株覆有白色或红色茸毛，果实成熟后呈鲜红色，周年挂果，果叶相映呈现出喜庆祥和的观赏效果，是室内观叶植物的首选佳品。此外，虎舌红全草入药，有清热利湿、活血止血、去腐去肌等功效，具有极高药用价值。

目前虎舌红的繁殖方式主要有播种繁殖、扦插繁殖、嫁接繁殖和组培繁殖。播种繁殖是虎舌红的主要繁殖方式，虎舌红虽结实量大，但生产周期长、实生苗性状不稳定，多数实生苗出现叶片发绿、茸毛发白现象，无法保持母本的优良种质特性，经济价值大大降低。此外，虎舌红生长缓慢，侧枝少，无法保证扦插、嫁接穗条的供应。由于植物组织培养技术具有实验所需材料少，繁殖系数大，培养条件可控性强和培养周期短等优点，因此，组织培养技术是植物繁殖高效的方法。然而，虎舌红的茎段和叶片被绒毛，使得消毒困难，团队成员候娜等(2015)研究得出虎舌红茎段污染率高，且茎段增殖率较低，不能满足产业化生产。本发明为解决上述问题，以虎舌红成熟胚作为外植体，通过诱导愈伤组织、愈伤组织分化和不定芽增殖途径对虎舌红进行扩繁，以期为虎舌红繁殖、新品种开发和优良品种的保护提供技术依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，以解决虎舌红组织培养中消毒困难、增殖系数低等问题。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：一种虎舌红成熟胚的愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，包括以下步骤：

(1)种子处理：取无病虫害和生长健壮植株上的成熟果实，首先用肥皂水清洗去掉外种皮，其次用清水漂洗将沉水的种子捞出，最后将捞出的种子用流动的清水冲洗30min转至超净工作台；

(2)无菌种子：在超净工作台中，将步骤(1)中的种子用70％～75％酒精浸泡30～60s，1％～2％NaClO浸泡5～8min，期间间隔10～30s摇晃一次，再用无菌水漂洗3～5次后获得无菌种子；

(3)外植体的获取：将步骤(2)中的无菌种子用灭菌滤纸吸干水分后，用灭菌镊子和刀片将种子剖开取出成熟胚作为外植体；

(4)愈伤组织诱导与分化诱导：将步骤(3)的外植体接种至MS培养基中，MS培养基中添加6-BA(0.5～1.0mg·L^-1)、KT(0.5～1.0mg·L^-1)和NAA(0.2～0.5mg·L^-1)、蔗糖30g·L^-1和结冷胶2.5g·L^-1，培养30～40天；转接至相同组分浓度的愈伤组织诱导与分化诱导培养基中继续培养30～40天；

(5)不定芽增殖：将步骤(4)分化的不定芽转接至MS培养基，MS培养基中添加6-BA(2.0～8mg·L^-1)、GA3(1～2.0mg·L^-1)、IAA(0.1～0.5mg·L^-1)、蔗糖30g·L^-1和结冷胶2.5g·L^-1。

本技术方案的有益效果在于：