[发明专利]一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法

权利要求书

1.一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)种子处理：取无病虫害和生长健壮植株上的成熟果实，首先用肥皂水清洗去掉外种皮，其次用清水漂洗将沉水的种子捞出，最后将捞出的种子用流动的清水冲洗30min转至超净工作台；

(2)无菌种子：在超净工作台中，将步骤(1)中的种子用75％酒精浸泡1min，2％NaClO浸泡5min，期间间隔10～30s摇晃一次，再用无菌水漂洗3～5次后获得无菌种子；

(3)外植体的获取：将步骤(2)中的无菌种子用灭菌滤纸吸干水分后，用灭菌镊子和刀片将种子剖开取出成熟胚作为外植体；

(4)愈伤组织诱导与分化诱导：将步骤(3)的外植体接种至愈伤组织诱导与分化诱导培养基中，愈伤组织诱导与分化诱导培养基为MS培养基+0.5mg·L^-16-BA+0.5mg·L^-1NAA，培养30～40天，转接至相同组分浓度的愈伤组织诱导与分化诱导培养基中继续培养30～40天；

(5)不定芽增殖：将步骤(4)分化的不定芽转接至MS培养基+4.0mg·L^-16-BA+2.0mg·L^-1GA₃+0.2mg·L^-1IAA，培养45～55天。

2.根据权利要求1所述的一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，步骤(1)中所述的虎舌红成熟果实，一年四季均可采收。

3.根据权利要求1所述的一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，步骤(4)、步骤(5)的MS培养基中还有蔗糖30g·L^-1和结冷胶2.5g·L^-1。

4.根据权利要求1所述的一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，步骤(4)、步骤(5)的培养基中pH值调节为5.95±0.01。

5.据权利要求1所述的一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，步骤(4)、步骤(5)的培养基均在121℃下、高压灭菌20min。

6.根据权利要求1所述的一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，步骤(4)为暗培养，培养温度为25±3℃。

7.根据权利要求1所述的一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，其特征在于，步骤(5)为光培养：光照强度2000～2500Lux、光照时间16h·d^-1、培养温度为25±3℃。