[发明专利]一种慢病毒转染免疫细胞的方法

说明书

本发明公开了一种慢病毒转染免疫细胞的方法。该方法包括在含有前列腺素E2的转染体系中采用慢病毒转染免疫细胞，所述慢病毒包括嵌合抗原受体基因转录的RNA。该方法可应用于αβT细胞、γδT细胞和NK细胞的转染，转染效率高且能减小转染对免疫细胞的影响。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种慢病毒转染免疫细胞的方法。

背景技术

CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是指通过基因修饰技术，将带有特异性抗原识别结构域及T细胞激活信号的遗传物质(CAR)转入T淋巴细胞，使T淋巴细胞直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而被激活。T淋巴细胞被激活后，一方面通过释放穿孔素、颗粒酶素B等直接杀伤肿瘤细胞；另一方面通过释放细胞因子，募集人体内源性免疫细胞来杀伤肿瘤细胞，以达到治疗肿瘤的目的。同时，还可形成免疫记忆T细胞，从而获得特异性的抗肿瘤长效机制。CAR-T疗法在治疗急性白血病和非霍奇金淋巴瘤上具有显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。

人的T淋巴细胞按照其表面T细胞抗原受体的不同，可以分为αβT细胞和γδT细胞两大类。αβT细胞占95％左右，即为常说的T细胞。γδT细胞占T细胞的1～10％，但它发挥作用不依赖MHC识别，从而可以抵抗肿瘤的逃逸。CAR-T疗法的关键，就是要给T淋巴细胞装备上能识别特定癌细胞的CAR分子，使其能够特异性识别并杀伤癌细胞，从而达到治疗癌症的效果。但是由于需转入免疫细胞的嵌合抗原受体(CAR)的基因序列较大，导致转染效率低下，从而影响了CAR-T细胞的功能。因此寻找可提高免疫细胞特别是难转染的γδT等细胞的转染效率的助转染试剂，对于临床治疗具有重要意义。

CAR-NK疗法是一种基于自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)的过继性细胞疗法，利用基因改造技术，将为T细胞定位导航的CAR(嵌合抗原受体)分子用于修饰NK细胞，形成CAR-NK杂交细胞。NK细胞是机体重要的免疫细胞，与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关。由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体，因此称为自然杀伤活性，与γδT细胞的作用相似，且同样难以转染，

而传统的助转染试剂如Polybrene、PS(Protamine Sulfate)等在免疫细胞上不能获得高的转染效率，因此需要发现更有效的方法进行转染。

发明内容

本发明提供了一种慢病毒转染免疫细胞的方法，所述方法包括在含有前列腺素E2的转染体系中采用慢病毒转染免疫细胞，所述慢病毒包括嵌合抗原受体基因转录的RNA。

所述转染体系还可包括无血清培养基。所述无血清培养基由KBM581和IL-2组成。所述IL-2在所述无血清培养基中的含量为200IU/ml。

所述前列腺素E2在所述转染体系中的浓度例如为0.5-2μM。

可选地，所述免疫细胞的数量与所述转染体系比例为3×10⁵个-5×10⁵个：500μL。

所述慢病毒在所述免疫细胞表达所述嵌合抗原受体基因。嵌合抗原受体基因即为CAR基因。所述CAR基因表达嵌合抗原受体。该嵌合抗原受体靶向的抗原包括但不限于CD19、CD20、CD22、CD30、HER2、GD2、EGFR、EGFRvIII、EphA2、IL13Ra2、CD133、ROR1、IGF1R和/或L1CAM。