[发明专利]一种重组链球菌及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种重组链球菌及其制备方法和应用。所述重组链球菌为：通过将猪圆环病毒2型的Cap蛋白的编码序列插入链球菌中Szp基因序列中得到。本发明通过构建包含有链球菌中Szp基因上下同源臂片段和猪圆环病毒2型的Cap蛋白的编码序列的重组载体，进而同源重组得到一种重组链球菌ST₁₇₁‑Cap，其对于猪圆环病毒2型和链球菌都具有较好的保护力，且相较于单独的猪圆环病毒2型的Cap蛋白亚单位疫苗而言，具备更高的免疫原性。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种重组链球菌及其制备方法和应用。

背景技术

猪圆环病毒Ⅱ型(Porcinecircovirus2，PCV2)是圆环病毒科圆环病毒属的一种无囊膜、共价闭环单股负链DNA病毒(ssDNA)，是目前为止发现的所有动物病毒中最小的之一。猪对PCV2均易感，但是其危害主要为感染断奶仔猪并引起多系统衰竭综合征(PMWS)，该病对养猪业的危害相当严重，是影响猪业发展的一种重要疾病。1991年，加拿大首次发现猪圆环病毒病的流行，之后在全球范围迅速流行，严重影响全球养猪业健康发展。PCV2基因大小约为1.7kb，含有11个开放阅读框(ORF)，ORF1和ORF2是其中两个最主要的开放阅读框，分别编码病毒复制相关蛋白(Rep)和233～235个氨基酸大小的病毒衣壳结构蛋白(Cap)。其中Cap蛋白是病毒的免疫保护性抗原，宿主细胞含有与其结合的受体，与病毒的感染密切相关，含有病毒诱导机体产生特异性免疫应答的主要抗原表位。因此，该蛋白是研制PCV2相关疫苗的焦点和检测PCV2特异性免疫反应的血清学诊断方法的靶抗原。

现已证实，PCV2感染主要侵袭猪只的免疫系统，并引起猪只多个系统进行性功能衰竭，导致免疫抵抗力下降和免疫抑制，猪只机体难以产生和维持对其他病原体的免疫抗体，从而继发其他疾病。研究揭示了多种与PCV2感染猪群相关的并发感染病原体，猪链球菌就是其中之一。因此，PCV2的危害性不能孤立而言。此外，PCV2对外界理化因子的抵抗力相当强，可于外界环境存在很长一段时间，即使是酸性环境和氯仿溶液中也可存活较长时间，在72℃温度作用下也能存活一段时间。PCV2于养殖场中很难净化，免疫接种是预防猪圆环病毒病以及猪链球菌病的重要措施。目前的商品化疫苗种类繁多，包括弱毒苗、灭活苗、亚单位疫苗、口服疫苗和病毒(细菌)载体疫苗等，临床应用免疫效果良好。但是由于PCV2的致病机理仍未十分确切，其至今仍是影响养猪业发展的重要疾病之一。现有的商业化疫苗免疫成本高，且因为PCV2基因型变异等因素注存在免疫失败的风险。目前PCV2仍在猪群中流行，这促使高效廉价的疫苗研发成为必要，增强免疫效果和降低经济损失。

免疫预防是防制传染病的有效手段之一，目前市面上的商品化猪链球菌疫苗种类繁多，均是各种不同菌株的弱毒疫苗以及灭活疫苗。目前用于预防PCV2感染的商品化疫苗，诸如灭活苗、亚单位疫苗、口服疫苗和病毒载体疫苗等价格普遍较高，给养猪业增加了生产成本。

Wang等将截断型的PCV2Cap基因克隆于乳酸链球菌穿梭载体得到重组载体pSEC：LEISS-dCap。将其电转化并构建了重组乳酸菌LEISS-dCap口服疫苗株。同样，Kim等电转化将PCV2Cap基因克隆入aroA基因缺失的支气管炎博德特氏菌，获得表达Cap蛋白的重组菌BBS-MCP。该两种重组菌通过免疫小鼠或猪只均能诱导高水平抗Cap蛋白特异性抗体，且能有效保护猪群。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种重组链球菌及其制备方法和应用。

第一方面，本发明提供一种重组链球菌，所述重组链球菌为：

通过将猪圆环病毒2型的Cap蛋白的编码序列插入链球菌中Szp基因序列中得到。

进一步地，所述链球菌为猪链球菌ST₁₇₁弱毒株。

猪链球菌ST₁₇₁弱毒株的基因序列已公开，GenBank登录号为CP002904。