[发明专利]一种NAMPT基因修饰间充质干细胞外泌体的制备方法在审
| 申请号： | 202110378001.X | 申请日： | 2021-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN112980801A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 崔恒宓;周琦琦 | 申请（专利权）人： | 江苏易诺维生物医学研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/54;C12N15/867 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211100 江苏省南京市江宁区苏源大道1*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 nampt 基因 修饰 间充质 干细胞 外泌体 制备 方法 | ||
1.一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a、构建NAMPT高表达慢病毒载体；
b、将NAMPT高表达慢病毒质粒与vsvg包膜质粒、PCMV-delta R8.2包装质粒共转染293T细胞，包装病毒，收集上清；
c、用收集的病毒上清感染间充质干细胞，药筛后得到稳定高表达NAMPT基因间充质干细胞株；
d、收集高表达NAMPT细胞株培养基，利用外泌体试剂盒提取，获得高表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体。
2.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述NAMPT基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
3.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤b中所述NAMPT高表达慢病毒质粒中慢病毒的元件顺序为CMV-MCS-3XFLAG-6xHis-IRES-puro。
4.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤b中质粒共转染的各质粒浓度比为PLVX-IRES-NAMPT-puro:PCMV-deltaR8.2:vsvg＝3:2:1。
5.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤b中收集上清后500g离心5min，0.45μm滤器过滤。
6.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤c中感染间充质干细胞时病毒上清与MEM培养基两者的体积之比为1:3。
7.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤c中感染间充质干细胞加入100mg/ml鲑精蛋白。
8.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤c中嘌呤霉素药物筛选浓度为0.4μg/ml。
9.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞为永生化人脐带间充质干细胞。
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