[发明专利]一种用于检测非洲马瘟病毒的核酸组合物及其试剂盒

说明书

本申请公开了一种用于检测非洲马瘟病毒的核酸组合物及其试剂盒，属于病毒体外核酸检测技术领域。所述核酸组合物包括上游引物、下游引物和检测探针，上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，检测探针序列如SEQ ID NO.3所示。含有上述核酸组合物的试剂盒能够特异性的检测待测样品中非洲马瘟病毒，与马脑炎病毒等8种病原体无交叉反应；且灵敏度高，可达10³copies/mL，重复性好，质量可控，整个RT‑PCR检测过程操作简单，检测时间短，检测效率高。

技术领域

本申请涉及病毒体外核酸检测技术领域，特别涉及一种用于检测非洲马瘟病毒的核酸组合物及其试剂盒。

背景技术

非洲马瘟(African house sickness,AHS)是由呼肠病毒科的双股RNA环状病毒属引起的一种马属动物非接触性急性或亚急性传染病，通过库蠓等吸血昆虫叮咬传播，主要症状为发热、皮下水肿和病毒血症，严重时伴有组织和脏器出血，马最易感，病死率可达95％。

AHS的死亡率与感染动物的种类、病毒的血清型或株型相关。马属动物中马最为敏感，死亡率为50％～95％，其次为骡，死亡率约50％。在AHS呈地方性流行的非洲地区，驴的抵抗力较强，仅呈亚临床感染。在欧洲和亚洲国家，驴对AHSV中等敏感，死亡率为10％。到2020年4月，泰国已有一百多匹马死于非洲马瘟，最近疫点离我国边境直线距离不足800公里。而且，我国已在国内检出非洲马瘟传播媒介昆虫，疫情传入我国的风险较高，我国马属动物均易感，疫情传入我国后的暴露风险高、后果和损失将非常严重。

AHSV的检测方法有快速抗原捕捉ELISA方法、PCR法、病毒的细胞培养和乳鼠接种试验法。除PCR法外，快速抗原捕捉ELISA方法、病毒的细胞培养和乳鼠接种试验法，操作复杂，检测时间长。荧光PCR技术作为一种成熟的核酸检测方法，特异性强，敏感性高，可在短时间内完成样本的检测。但目前相关的采用荧光PCR技术检测非洲马瘟病毒的试剂盒灵敏度不高，容易出现假阴性结果。所以，研制开发一种供兽医诊断使用的高灵敏度的非洲马瘟病毒荧光RT-PCR检测试剂盒具有现实意义。

发明内容

针对相关技术中检测非洲马瘟病毒试剂盒的灵敏度不高的问题，本申请提供一种用于检测非洲马瘟病毒的核酸组合物及其试剂盒。

第一方面，本申请的一种用于检测非洲马瘟病毒的核酸组合物，是通过以下技术方案得以实现的。

一种用于检测非洲马瘟病毒的核酸组合物，包括上游引物、下游引物和检测探针；

上游引物序列如SEQ ID NO.1所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

检测探针序列如SEQ ID NO.3所示。

通过采用上述技术方案，本申请针对非洲马瘟病毒结构蛋白7基因区域的高度保守区设计了特异性的引物和探针序列，设计的引物能够与非洲马瘟病毒的核酸结合，从而特异性的指示待测样品中是否存在非洲马瘟病毒。而且，本申请设计得到的引物和探针不会发生相互配对或自我配对的情况，提高了引物和探针的有效性和检测的灵敏度。

可选的，所述核酸组合物还包括内标上游引物、内标下游引物和内标探针；

内标上游引物序列如SEQ ID NO.4所示；

内标下游引物序列如SEQ ID NO.5所示；

内标探针序列如SEQ ID NO.6所示。

通过采用上述技术方案，本申请还针对目的基因组的内标设计了引物和探针，实现同时对AHSV靶基因及外源性目的基因的扩增，可对整个检测过程进行质量监控，保证检测结果的有效性。