[发明专利]一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种新冠病毒胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S10、利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液；

S20、制备金标记S蛋白和N蛋白：利用碳酸钾分别将制备好的胶体金溶液调节PH至7.5±0.5和9.5±0.5，以分别形成胶体金溶液A和胶体金溶液B，分别再用双蒸水稀释标记S蛋白和N蛋白至浓度为0.5-2mg/ml，然后将S蛋白逐滴加入搅拌的胶体金A溶液中，N蛋白逐滴加入搅拌的胶体金B溶液中，保持搅拌20-30min，分别胶体金A溶液和胶体金B溶液中加10％BSA至终浓度为0.2％-0.5%，封闭裸露金颗粒， 4℃下继续搅拌20-30min，并以6000r/min离心20-30min，浓缩备用；

S30、利用缓冲溶液1稀释S20中的金标记S蛋白，并均匀铺在金标结合物垫上以形成金标S蛋白结合物垫；利用缓冲溶液2处理金标结合物垫后并将S20中的金标记N蛋白喷于处理好的金标结合物垫上以形成金标N蛋白结合物垫；

S40、将抗人IgM、抗人IgG和羊抗兔分别用缓冲溶液3稀释，然后将抗人IgM、抗人IgG和羊抗兔包被于硝酸纤维素膜上以分别形成第一检测线、第二检测线和质控线，37-45℃干燥12-18小时备用；

S50、利用缓冲溶液4浸泡样品垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥，切割备用；

S60、按样品垫、金标S蛋白结合物垫、金标N蛋白结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺序粘附于支撑底板上组装试纸，并切割包装；

其中，步骤S10中采用球形瓶、悬臂式磁力搅拌桨配合数显夹套式磁力搅拌器烧制颗粒均一的直径为35-45nm的胶体金颗粒，分光光度计测其最高峰在530±5nm，OD值在1.0±0.1；

所述S30中缓冲溶液1由Tris-Hcl、蔗糖、海藻糖、BSA、PEG20000、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠、吐温-20组成，其中，所述Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，蔗糖质量终浓度为3％-10％，海藻糖质量终浓度为1％-5％，BSA质量终浓度为1％-3％，PEG20000质量终浓度为0.05％-0.5％，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠质量终浓度为0.1％-1.0％，吐温-20质量终浓度为0.1％-0.5％；

所述S30中缓冲溶液2由Tris-Hcl、蔗糖、BSA、酪蛋白和月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠组成，其中，所述Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，蔗糖质量终浓度为3％-10％，BSA质量终浓度为0.5％-3％，酪蛋白质量终浓度为0.1％-1.0％，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠质量终浓度为0.1％-1.0％。

2.根据权利要求1所述的一种新冠病毒胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于：所述S40中缓冲溶液3由 PBS和蔗糖组成，其中PBS摩尔浓度为10-100mM，蔗糖质量终浓度为1％-5％。

3.根据权利要求1所述的一种新冠病毒胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于：所述S50中缓冲溶液4由Tris-Hcl、BSA、酪蛋白、 PEG20000和吐温-20组成，其中Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，BSA质量终浓度为0.5％-5％，酪蛋白质量终浓度为0.1％-2％，PEG20000质量终浓度为0.1％-1.0％，吐温-20质量终浓度为0.1％-0.5％。

4.根据权利要求1所述的一种新冠病毒胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于：

所述新冠病毒胶体金检测试纸用于检测人全血、血清和血浆中的新冠病毒IgM和IgG抗体；

和/或；

所述的金标结合物垫和样品垫由玻璃纤维制备而成；

和/或；

所述第一检测线与所述第二检测线之间的距离以及所述第二检测线与质控线两两之间的距离为3-8mm；

和/或；

在所述S30和S40之间还包括S31，所述S31分别对所述S30中的金标S蛋白结合物垫和金标N蛋白结合物垫真空冷冻干燥备用。

5.一种新冠病毒胶体金检测试纸，其特征在于：采用如权利要求1-4任一所述的制备方法制备而成。