[发明专利]丹参酮ⅡA合酶基因及应用

权利要求书

1.丹参酮ⅡA合酶的基因TⅡAS，其核苷酸序列如下之一：

1）SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7所示的核苷酸序列；

2）核苷酸序列一致性与SEQ ID No.1达到99%以上的来源于丹参同源基因，且编码的蛋白质仍具有丹参酮ⅡA合酶的活性。

2. 根据权利要求1所述的基因TⅡAS，其特征在于：所述的丹参酮ⅡA合酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7所示。

3.一种由权利要求1或2所述的基因TⅡAS编码的蛋白质。

4.根据权利要求3所述的蛋白质，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ IDNo.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8所示。

5.含有权利要求1或2所述的基因TⅡAS的重组载体。

6.如权利要求5所述的重组载体，其特征在于，是表达载体。

7.如权利要求6所述的重组载体，其特征在于，是细菌、真菌或植物表达载体。

8.含有权利要求1或2所述的基因TⅡAS或如权利要求5所述重组载体的宿主细胞，所述细胞是细菌或真菌。

9.如权利要求8所述的细胞，其特征在于，为大肠杆菌或酵母细胞。

10.含有权利要求1或2所述的基因TⅡAS或如权利要求3或4所述的蛋白质在生产或制备丹参酮ⅡA或异丹参酮ⅡA中的应用。

11.利用微生物发酵催化隐丹参酮生成丹参酮ⅡA，或催化异隐丹参酮生成异丹参酮ⅡA的生产方法，其特征在于，所述微生物中导入并表达如权利要求1或2所述的基因TⅡAS；培养含有表达所述基因TⅡAS的微生物，从微生物菌体中提取丹参酮ⅡA或异丹参酮ⅡA，其中培养基中添加隐丹参酮或异隐丹参酮。

12.如权利要求11所述的生产方法，其特征在于，所述微生物是大肠杆菌或酵母。

13.一种提高丹参的丹参酮ⅡA含量的方法，其特征在于，将如权利要求1或2所述的基因TⅡAS导入目标丹参中，以获得过表达所述基因TⅡAS的转基因植株。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，利用所构建的含有所述基因TⅡAS的农杆菌或根癌农杆菌菌株转化丹参，获得过表达所述基因TⅡAS的转基因丹参植株或发根，其中丹参酮ⅡA的含量得到提高。

15.利用如权利要求3或4所述的蛋白质在体外生产或制备丹参酮ⅡA或异丹参酮ⅡA中的方法，其特征在于，采用如权利要求3或4所述的蛋白质催化隐丹参酮生成丹参酮ⅡA，或催化异隐丹参酮生成异丹参酮ⅡA，且反应体系中含有α-酮戊二酸。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，反应体系中还含有Fe²⁺和/或抗坏血酸。

17.如权利要求15所述的方法，其特征在于，权利要求3或4所述的蛋白质通过基因工程菌发酵后提取得到的。