[发明专利]一种低于冰点的肝脏细胞标记用纳米荧光探针溶液及应用

说明书

本发明属于纳米材料生物成像领域，公开了一种低于冰点的肝脏细胞标记用纳米荧光探针溶液及应用，纳米荧光探针溶液包括作为分散质分散于其中的纳米荧光探针；纳米荧光探针包括纳米荧光颗粒和偶联在纳米荧光颗粒表面的靶向分子，靶向分子能够用于靶向肝脏特定细胞；并且，纳米荧光探针溶液中还包括防冻物质，防冻物质的浓度满足使纳米荧光探针溶液在低于冰点的温度下保持液态。本发明通过对纳米荧光探针溶液的细节结构及组成进行改进，能够以预先选定细胞种类的肝脏特定细胞为目标细胞，基于纳米荧光探针实现在低于冰点时对肝细胞进行免疫荧光标记，具有快速、简便、高效的特点，尤其适用于作为荧光标记物应用于肝脏显微光学切片层析成像技术中。

技术领域

本发明属于纳米材料生物成像领域，更具体地，涉及一种低于冰点的肝脏细胞标记用纳米荧光探针溶液及应用。

背景技术

免疫荧光技术由于具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，可准确地进行细胞定位，因此可用于肝脏的显微光学切片层析成像技术中。在免疫荧光组织化学研究中，通常需要制备组织切片进行免疫荧光染色来观测细胞。冰冻切片因操作简便、省时快速、环境污染小、抗原免疫原性损伤小、RNA信息完整等优点被许多研究者所采用，使用免疫荧光技术对冰冻切片进行荧光标记成像是免疫组织化学研究中不可缺少的手段。然而，传统的有机荧光染料由于受到抗光漂白能力弱、荧光寿命短、激发谱窄和发射谱宽等诸多因素的影响，尤其是难以在低于冰点的环境下对冰冻切片进行多色荧光标记成像(即标记过程也需在低于冰点的温度下进行)，限制了它们的应用范围。纳米荧光探针作为一种新型的纳米荧光标记物，具有量子产率高、激发光谱宽而连续、可单色激发多色荧光发射、发射波长可调、化学稳定性好、抗光漂白性强、荧光寿命长、发射光谱窄而对称因而能有效减少多色荧光成像中光谱交叠问题，这些优异的光学特性使得纳米荧光探针在许多领域可以取代传统的有机荧光染料，作为荧光探针用于生物分子的标记和检测。

虽然纳米荧光探针能够取代传统有机荧光染料在常温下进行标记，但在针对冰点以下的标记应用场景时，纳米荧光探针往往无法发挥较好的作用，现有技术往往仍是采用传统的有机荧光染料。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明的目的在于提供一种低于冰点的肝脏细胞标记用纳米荧光探针溶液及应用，其中通过对纳米荧光探针溶液的细节结构及组成进行改进，能够以预先选定细胞种类的肝脏特定细胞为目标细胞，加以防冻物质，基于纳米荧光探针实现在低于冰点对肝细胞进行免疫荧光标记，具有快速、简便、高效的特点，尤其适用于作为肝脏特定细胞的荧光标记物应用于肝脏显微光学切片层析成像技术中。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种用于在低于冰点时对肝脏特定细胞进行标记的纳米荧光探针溶液，其特征在于，该纳米荧光探针溶液包括作为分散质分散于其中的纳米荧光探针；所述纳米荧光探针包括纳米荧光颗粒和偶联在所述纳米荧光颗粒表面的靶向分子，肝脏特定细胞的细胞种类预先选定，所述靶向分子能够用于靶向所述肝脏特定细胞；

并且，所述纳米荧光探针溶液中还包括防冻物质，防冻物质的浓度满足使纳米荧光探针溶液在低于冰点的温度下保持液态。

作为本发明的进一步优选，所述防冻物质为醇类或金属氯化物。

作为本发明的进一步优选，所述纳米荧光颗粒选自CdSe@ZnS量子点、CdTe量子点、石墨烯量子点、碳点、聚合物纳米荧光颗粒和纳米荧光硅颗粒，其中，所述CdSe@ZnS量子点是以CdSe为核、ZnS为壳的核壳量子点。

作为本发明的进一步优选，所述靶向分子为核酸序列或肽段序列，优选为抗体。

作为本发明的进一步优选，所述肝脏特定细胞的细胞种类选自肝窦内皮细胞、肝巨噬细胞和肝星状细胞。

按照本发明的又一方面，本发明提供了上述纳米荧光探针溶液在标记肝脏切片中肝脏特定细胞的应用；优选的，标记过程在低于冰点的温度下进行。