[发明专利]一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒及检测方法，属于分析检测技术领域。本发明公开的一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒，可以对人体内叶酸代谢衍生物中的叶酸、四氢叶酸、5‑甲基四氢叶酸、5‑甲酰四氢叶酸、5,10‑亚甲基四氢叶酸、S‑腺苷甲硫氨酸、S‑腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸血清(血浆)含量进行检测；方法具有简单，快捷，专属性强，灵敏度高，检测指标全面等特点；可以在临床应用中，为了解叶酸代谢情况提供参考依据。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，更具体的说是涉及一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒及检测方法。

背景技术

叶酸(folate)是一类物质的总称，其中包括了叶酸(folic acid)及其衍生物5-甲酰四氢叶酸(5-FoTHF，亚叶酸)，5-甲基四氢叶酸(5-MeTHF)，5,10-亚甲基四氢叶酸和四氢叶酸(THF)等。叶酸主要影响DNA合成和DNA甲基化两个过程，一方面是尿嘧啶脱氧核苷酸(dUMP)到胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)的转化，dUMP因叶酸缺乏导致积累，而错误掺入DNA。大量掺入的dUMP在随后的DNA复制和修复过程中容易诱发基因突变、DNA单双链断裂、染色体断裂等基因组稳定性下降事件及细胞恶性转化。另一方面是5-甲基四氢叶酸在催化下将甲基转移到同型半胱氨酸上，使其转化为甲硫氨酸，随即形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)，SAM是胞嘧啶甲基化过程中的甲基供体。叶酸摄入不足将影响同型半胱氨酸代谢途径，导致DNA和RNA甲基化异常及改变基因表达，从而引发各类相关疾病的发生。

目前，叶酸检测多以化学发光法为主，常常单独测试叶酸及同型半胱氨酸，主要因为此方法具有自动化程度高，重现性好，灵敏度高等优点。但是，化学发光法无法对叶酸代谢中的多种衍生物同时进行检测。质谱平台上，以往报道多以叶酸和同型半胱氨酸、半胱氨酸等组合或叶酸与5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸等组合，都只能对叶酸代谢衍生物的其中一个影响路径指标进行测试。

因此，提供一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒及检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒及检测方法，基于液相串联质谱平台全面对叶酸代谢过程中的多种关键化合物进行定量检测，方法高效，灵敏，检测下限较低，而且准确度高，能对整个叶酸代谢水平进行全面评估。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测试剂盒，包括如下组分：

进一步，所述校准品的组成如下：

进一步，所述质控品的组成如下：

一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测方法，采用液相串联质谱法：先用提取试剂对样本(校准品、质控品、血清(血浆)样本)提取纯化，然后再通过液相串联质谱仪对各个衍生物进行分离，检测。

一种测试人体叶酸代谢衍生物的液相串联质谱检测方法，对叶酸代谢的衍生物：叶酸、四氢叶酸、5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸、S-腺苷甲硫氨酸、S-腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸进行区分，并准确检测；利用所述的试剂盒进行检测，具体步骤如下：

(1)取100～200μL样本(血清、校准品或质控品)至Ep管中，加入5μL混合内标溶液后，加入500μL提取液1后涡旋振荡1min，混匀；

(2)离心后转移400～500μL上清于96孔进样板中；

(3)氮气吹干；