[发明专利]一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，其特征在于，采用LC-MS检测血液样品中多种胆汁酸；色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITYUPLC HSS T3，1.8μm，2.1×100mm，柱温：30℃；流动相A：5mM乙酸铵溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱条件：0-1.2min 30-35％B,1.2-2min 35％B,2-3min35-41％B,3-4min 41-45％B,4-4.5min 45％B,4.5-5.3min 45％B,5.3-5.5min45-80％B,5.5-7.5min 80％B,7.5-8.7min 80-35％B,8.7-9.2min 35％B,9.2-10.5min 35％B，流速0.4mL/min，进样量1μL；质谱条件：采用ESI源，MRM正负离子扫描模式，雾化气流量为3L/min，加热气流量为13L/min，接口温度为350℃，DL温度为250℃，加热块温度为400℃，干燥气流量为7L/min。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，其特征在于，所述血液样品为血浆或血清。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，其特征在于，所述多种胆汁酸为牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨胆酸、胆酸、石胆酸、牛磺胆酸和牛磺石胆酸中的至少两种。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，其特征在于，所述多种胆汁酸为牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨胆酸、胆酸、石胆酸、牛磺胆酸和牛磺石胆酸。

5.根据权利要求1所述的一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)待测样本处理：取样本涡旋30s后，取400μl悬浮液样本于1.5ml Ep管中，4℃以13000rpm离心15min；取上清液100μL，置于1.5mL Ep管，加入100μL甲醇稀释；加入1μL N-1-萘基酞氨酸内标溶液混匀后用0.22μm微孔滤膜过滤，将全部样品转移至96孔板中，覆上铝箔封膜，检测备用；

(2)标准溶液配制：标准品均用甲醇溶解，配制成单标母液浓度为5mM的标准品，分别取各单标母液等量混合成浓度为0.33mM的混合储备液，用甲醇稀释系列浓度；

(3)内标溶液配制：内标用甲醇稀释，配制成浓度为0.033mM的内标储备液；

(4)LC-MS检测：将待测样本通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离后，对待测物质进行定性与定量检测。

6.一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的试剂盒，其特征在于，包括如下组分：标准溶液，内标溶液，甲醇，乙腈，5mM乙酸铵溶液，质控品；所述多种胆汁酸为牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨胆酸、胆酸、石胆酸、牛磺胆酸和牛磺石胆酸中的至少两种。

7.权利要求6所述的试剂盒在同时检测牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨胆酸、胆酸、石胆酸、牛磺胆酸和牛磺石胆酸中的应用。