[发明专利]一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法

说明书

本发明公开了一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法，属于生物技术领域。本发明公开的一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法，包括测量标准大蒜鳞芽茎盘厚度，去除部分茎盘，获取标准大蒜鳞芽生长点。本发明不用反复剥离大蒜鳞芽周围的肉质体和大蒜鳞芽生长点周围的一层层叶片，减少了剥离切割的次数(即减少了剥离操作时间)，降低了剥离过程中引入菌体污染生长点的风险，有效避免了生长点被大量污染，同时提高了剥离大蒜鳞芽获得生长点的效率，缩短了操作时间，操作更便捷，提高了发芽率，降低了污染率，提高了无菌苗的获得率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法。

背景技术

大蒜(Allium sativumL.)为百合科二年生植物，原产西亚和中亚，自汉代从西域传入我国，至今已有两千多年的栽培历史。大蒜既可食用，又可入药，具有极高的营养价值和经济价值。我国的大蒜产量常年位居世界首位。生产中大蒜大多通过鳞芽进行无性繁殖。因鳞芽易感染病毒，并以无性繁殖的方式代代相传，致使大蒜植株内病毒含量逐代积累增高，引起大蒜优良品种种性逐年退化，产量和品质逐年降低，带毒大蒜的产量损失可达50％以上，严重的可能造成绝产；其中以洋葱黄矮病毒(OYDV)、韭葱黄条纹病毒(LYSV)、青葱潜隐病毒(SHLV)的影响最大，在大蒜生产过程上会造成严重危害，进而给蒜农带来巨大的经济损失。利用大蒜鳞芽生长点带病毒少，或者不带病毒的原理，剥离切取大蒜鳞芽生长点进行脱毒培养，获得大蒜脱毒种是生产中解决病毒影响的有效手段。但是，在剥离大蒜鳞芽生长点的过程中还存在许多问题没有解决；例如，大蒜鳞芽剥离过程中会引入病菌，造成大蒜鳞芽生长点培养过程中的污染，严重影响大蒜鳞芽生长点的脱毒培养；常规大蒜鳞芽剥离方法引起的污染率在30％以上，并且剥离获取生长点的过程非常耗时(获得一个生长点需要10分钟以上)。

因此，提供一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法，控制大蒜鳞芽剥离过程中的污染问题并提高剥离效率，实现大蒜鳞芽生长点高效无菌培养，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法，该操作方法简便快捷，可以有效降低剥离过程中引发的生长点污染，提高大蒜鳞芽生长点无菌培养的效率，有极高的应用价值。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种剥离大蒜鳞芽生长点的方法，包括三个前后衔接的步骤：

(1)测量标准大蒜鳞芽生长点底部到标准大蒜鳞芽茎盘底部距离(即，测量标准大蒜鳞芽茎盘厚度)，具体包括如下几个相互衔接的步骤：

①根据大蒜品种，确定标准大蒜鳞芽纵径范围值，选取单一品种标准大蒜鳞芽；

②在步骤①获得的标准大蒜鳞芽群体中，随机选取标准大蒜鳞芽群体样本一个，样本数量≥30；

③以标准大蒜鳞芽生长点为中心纵向剖切所述标准大蒜鳞芽群体样本；

④测量标准大蒜鳞芽茎盘厚度，即分别测量该大蒜品种标准大蒜鳞芽群体样本生长点底部到标准大蒜鳞芽茎盘底部距离(大蒜鳞芽生长点底部和大蒜鳞芽径盘相互连接)；

⑤计算并获得该品种标准大蒜鳞芽生长点底部到大蒜鳞芽茎盘底部距离的最小值和最大值，即得到标准大蒜鳞芽径盘厚度的区间范围(常见大蒜标准鳞芽纵径值范围30-54mm，常见大蒜标准鳞芽径盘厚度范围3.1-5.3mm)；

(2)单一品种标准大蒜鳞芽生长点以下部位(部分茎盘)的去除，具体包括如下几个相互衔接的步骤：

①筛选单一品种标准大蒜鳞芽外植体，灭菌后放置于无菌环境中；

②根据所述标准大蒜鳞芽径盘厚度范围，用无菌刀片横向水平并垂直于标准大蒜鳞芽底部外表面切割去除相应品种标准大蒜鳞芽径盘厚度最小值的1/10-9/10备用；常见标准大蒜鳞芽径盘厚度的最小值的1/10-9/10是0.31-4.59mm；