[发明专利]一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法

说明书

本发明的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，包括核酸扩增反应液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反应液、阳性对照液、弱阳性对照液和阴性对照液，其中，甲/乙型流感病毒混合反应液包括甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探针、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针和DEPC水，其中内参是对产品本身内参的检测，本实施例的内参会参与核酸提取到RT‑PCR的过程，可用于对样本采集、保存和运输以及核酸提取过程和扩增过程进行监控，避免假阴性判读结果的出现。

技术领域

本发明属于流感病毒核酸检测技术领域，具体来说是一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法。

背景技术

流行性感冒是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，春冬季节高发，传播迅速，发病率高，流行期短，易引起暴发流行或大流行，控制难度较大。流感病毒包括甲、乙、丙三型，甲型最容易引起流行，乙型次之，丙型极少引起流行。流感病毒主要经空气飞沫传播，常引起发热、乏力、肌肉酸痛以及轻到中度的呼吸道症状，重者可致肺炎、心肌炎和心衰。由于这些病毒引起的感染症状和流行特点相似，仅靠临床症状对病原进行区分非常不可靠，实验室诊断方法有病毒分离、抗原检测与核酸检测等。

目前国内应用荧光PCR技术进行甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸检测的试剂盒主要为单重核酸检测试剂盒及甲/乙流通用检测试剂盒。这些试剂盒或是不能同时检测甲型流感病毒和乙型流感病毒；或是无法区分甲型流感和乙型流感，且操作时间较长，操作繁琐。而实际临床使用及疾病预防控制系统在追踪和分析病原体时常常要区分病原体种类和型别。

因此，亟需一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便的甲型流感病毒、乙型流感病毒检测方法。

发明内容

1.发明要解决的技术问题

本发明的目的在于解决现有的甲型流感病毒、乙型流感病毒检测不够便捷且难以对结果准确性进行评估的问题。

2.技术方案

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

本发明的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，包括核酸扩增反应液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反应液、阳性对照液、弱阳性对照液和阴性对照液。

优选的，所述甲/乙型流感病毒混合反应液包括甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探针、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针和DEPC水。

优选的，所述核酸扩增反应液包括核苷酸混合液、Buffer、MgCl₂溶液和DEPC水。

优选的，所述酶混合液包括DNA聚合酶、逆转录酶、UNG酶、RNA酶抑制剂和稀释液。

优选的，所述阳性对照液包括甲型流感病毒病毒样颗粒、乙型流感病毒病毒样颗粒、RNase P病毒样颗粒和TE缓冲液；所述弱阳性对照液为取1μL的阳性对照液与999μL的TE缓冲液混合制成；所述阴性对照为0.9％的氯化钠溶液。

优选的，所述甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探针、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针。

优选的，所述内参RNase P上游引物的序列为AGATTTGGACCTGCGAGCG，所述内参RNase P下游引物的序列为GAGCGGCTGTCTCCACAAGT，所述内参RNase P探针序列为TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。