[发明专利]尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物、探针及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物、探针及其应用。本发明的尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物，所述引物的核苷酸序列为FOV A‑F：5＇‑GCTCTAGTCAACCAAGCCGA‑3＇；FOV A‑R2：5＇‑CCAGCCTTGAACAAACAGATC‑3＇。本发明的尖孢镰刀菌萎蔫专化型具有特异性强、灵敏度高的特点，适用于棉花枯萎病菌数量的确定以及预测预报工作。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物、探针及其应用。

背景技术

棉花枯萎病是由尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum)引起的棉花系统性土传病害。棉花枯萎病在世界各地普遍发生，对棉花的品质和产量造成严重的损失。由于土传病害受气候等外界环境因子的影响相对较小，土壤中病原菌数量往往是病害流行的主要决定因素。因此构建可特异性检测尖孢镰刀菌萎蔫专化型的引物及探针，定量检测土壤中病原菌数量对此类病害预测预报及有效防治具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物、探针。

本发明的再一目的在于提供尖孢镰刀菌萎蔫专化型的检测方法。

本发明的再一目的在于提供尖孢镰刀菌萎蔫专化型的检测试剂盒。

本发明的再一目的在于提供尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物的应用。

本发明的再一目的在于提供尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物及其探针的应用。

根据本发明具体实施方式的尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物，其引物序列为

FOV A-F：5＇-GCTCTAGTCAACCAAGCCGA-3＇；

FOV A-R2：5＇-CCAGCCTTGAACAAACAGATC-3＇。

本发明还设计了与尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物配合使用的探针，探针序列为

FOV probe2：5＇-AGACCCTGCACTACGGAACCCGTTCCA-3＇。

上述FOV probe2探针的5＇端标记有荧光染料，3＇端标记有荧光淬灭基团，其中，荧光基团可选FAM、HEX、TET等，本发明的优选方案为FAM；淬灭基团可选TAMRA、BHQ等，本发明的优选方案为BHQ1。

根据本发明具体实施方式的尖孢镰刀菌萎蔫专化型的检测方法，包括使用上述尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物进行PCR扩增的步骤；或者，包括使用上述尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物及探针进行PCR扩增的步骤。

根据本发明具体实施方式的尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物的应用，其可以为棉花枯萎病的发生提供预测预报的作用，并可准确确定棉花枯萎病菌数量。

根据本发明具体实施方式的尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物及其探针的应用，其可以为棉花枯萎病的发生提供预测预报的作用，并可准确确定棉花枯萎病菌的数量。

本发明的有益效果：

本发明的尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物具有良好的特异性，能够特异性的检测尖孢镰刀菌萎蔫专化型，对其近缘种、属无扩增产物。本发明的灵敏度高，准确度高，在10～1×10⁶拷贝/μL范围内均可以准确检出。因此，本发明的尖孢镰刀菌萎蔫专化型特异性引物及其配合使用的探针可以用于棉花枯萎病菌数量的确定，并为棉花枯萎病的发生提供预测预报。

附图说明