[发明专利]一种依克多因的检测方法

说明书

本发明提供一种依克多因的检测方法，所述方法包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。本发明提供的依克多因的检测方法操作简单、检测时间短、分离效果好、精密度和准确度高、节省溶剂、样品制备便捷、能够用于快速准确检测依克多因。

技术领域

本发明涉及高效液相色谱检测领域，且更为具体地涉及一种依克多因的检测方法。

背景技术

依克多因(Ectoine)，又称四氢嘧啶(化学名为1，4，5，6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸，英文名为1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylic acid)，是一种环状氨基酸衍生物，它能在高盐、热变性、干燥、冰冻等极端环境下，被用作酶、核酸、膜及细胞的保护剂及稳定剂，因此在酶剂生产、医学、保健食品以及化妆品工业等领域具有广泛的应用前景。

目前，依克多因的检测方法主要是采用高效液相色谱法，但是它一种强烈的亲水性物质，在常规的色谱条件或常规反相色谱柱上的保留很弱，其应用范围主要在原料或水质中，对于基质比较复杂的化妆品领域还未有报道。其中，李耀东、龙启福、李文军等的高效液相色谱检测青海湖嗜盐菌胞内积聚的相溶物质四氢嘧啶一文采用乙腈/甲醇(V/V,95:5)EClipse XDB-C18柱(150×4.6mm)，柱温20℃，流速1.0mL/min，检测波长204nm等色谱条件分析Ectoine，文献中指出该色谱条件下Ectoine的保留时间为1.400-1.429min，从文献结果及色谱柱特性可知被分析物在该色谱条件及色谱柱上并未保留。贺冰,陶萍,陈爱连等的亲水相互作用色谱法测定中度嗜盐菌中四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶一文中采用亲水性色谱柱Merck-SeQuant ZIC-HILIC(150×4.6mm，5μm)，流动相乙腈:0.3％磷酸二氢钠缓冲液(pH5)＝80：20(V/V)，流速1mL/min，检测波长210nm，柱温30℃条件下分析，其四氢嘧啶保留时间在12分钟以上，时间较长，且分析成本较高。专利CN108120792A也公开了一种四氢嘧啶的高效液相检测及含量测定方法，该专利中采用Shiseido CAPCELL PAK ADME(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇/20mM磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH至3.0)＝5/95(V/V)，柱温为30℃，流速为1mL/min，检测波长为204nm等色谱条件对四氢嘧啶进行检测，该专利中四氢嘧啶的保留时间为3.739min，从其结果可知，被分析物在色谱柱上的保留也不是很理想，且该专利中的色谱柱为非常规分析色谱柱，成本较高。

发明内容

针对现有技术存在的依克多因检测方法的不足。本发明通过选择合适的色谱条件，提供一种依克多因的检测方法。

具体来说，本发明涉及如下的技术方案：

1、一种依克多因的检测方法，其特征在于，包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；

流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。

2、根据项1所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶柱为Poroshell 120EC-C18色谱柱。

3、根据项1或2所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱长为50-250mm，优选为100-250mm。

4、根据项1-3任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠溶液还包含1-庚烷磺酸钠，其中所述磷酸二氢钠溶液中磷酸二氢钠的浓度为5-100mM，优选为10-50mM，所述磷酸二氢钠溶液中1-庚烷磺酸钠的浓度为1-20mM，优选为5-15mM。