[发明专利]一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法

权利要求书

1.一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)一级种子制备，取杆菌菌种悬浊液接种于一级种子培养基中，一级种子培养基包括的原料为:每1000mL，包括胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.53g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化钠3-6g、磷酸氢二钠2.5-4g、七水硫酸镁0.5-1.5g，蒸馏水1000mL，pH为7.0-7.4，然后进行培养，二级种子制备，二级种子培养基包括的原料按质量百分比为，葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，磷酸氢二钾0.02％-0.05％，氯化钠0.5％-1％，硫酸镁0.02％-0.1％，培养基pH为6.5-7.5；

2)将一级种子接种于二级种子培养基中，发酵培养基包括的原料按质量百分比为:葡萄糖0.5％-2.5％、豆柏1.5％-4％、玉米浆1％-5％、酵母粉1％-3％、蛋白胨1％-3％、磷酸氢二钾0.01％-0.05％、硫酸镁0.1％-0.2％、硫酸锰0.002％和培养基pH为6.5-7.5，杆菌菌种悬浊液浓度为1X10¹⁰-2X10¹¹cfu/mL，将菌菌种悬浊液按照体积百分比1％-5％接种于一级种子培养基中，将含有一级种子的一级种子培养基按照体积百分比1％-5％接种于二级种子培养基中，将含有二级种子的二级种子培养基按照体积百分比1％-5％接种于发酵培养基中，将二级种子接种于发酵培养基中，然后进行发酵培养，当发酵至8-10h时流加补料培养基A，发酵至12-17h时流加补料培养基B，补料培养基A包含质量百分比10％-20％的碳源，补料培养基B包含质量百分比5％-10％的碳源和质量百分比1.8％-9.5％发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸；

3)补料培养基A和补料培养基B的流加量均为发酵培养基体积的0.1-1.0％，碳源为葡萄糖，所述发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸为赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸和精氨酸，补料培养基A的的原料及用量为，葡萄糖10％-20％，培养基pH为6.5-7.5，补料培养基B的原料及用量为，葡萄糖5％-10％，赖氨酸1.0％-4.0％，苯丙氨酸0.5％-3.0％，蛋氨酸0.2％-1.5％，精氨酸01％-1.0％，培养基pH为6.5-7.5，发酵培养基装入量为发酵罐有效容积的50％-70％；

4)将发酵出来的杆菌进行冷却、罐装及冷藏。

2.根据权利要求1所述的一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法，其特征在于：所述步骤1)中的杆菌菌种为植物乳杆菌和嗜热链球菌，植物乳杆菌接种量为1.0X10℃FU/g-1.0X10℃FU/g，嗜热链球菌接种量为1.0X10℃FU/g-1.0X10℃FU/g。

3.根据权利要求2所述的一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法，其特征在于：所述植物乳杆菌的接种量和嗜热链球菌的接种量之比1:9-9:1，植物乳杆菌的型号为植物乳杆菌ST-III和/或植物乳杆菌LP115，所述嗜热链球菌的型号为嗜热链球菌BODY-2和/或嗜热链球菌TA40。

4.根据权利要求1所述的一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法，其特征在于：所述步骤2)中一级种子培养温度37℃-40℃，时间16-24h，转速I80-200r/min，二级种子培养温度30℃-35℃，时间8-10h，转速180-200r/min。

5.根据权利要求1所述的一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法，其特征在于：所述均质的温度为60℃-70℃，所述均质的压力为18MPa-22MPa，较佳的为65℃、20MPa均质，所述杀菌的温度为90℃-95℃，所述杀菌的时间为5min-10min，较佳的为95℃杀菌5min，所述发酵的温度为37℃-42℃；所述的所需滴定酸度为70°T-90°T，较佳的为80°T，所述冷却的温度为16℃-22℃，所述冷却的方式为搅拌冷却或翻缸冷却；所述冷藏的温度为2℃-10℃，所述后熟的时间为12h-24h，较佳的为4C下冷藏后熟24h。

6.根据权利要求1所述的一种用于多糖类植物乳杆菌的稳定发酵方法，其特征在于：所述发酵剂为直投式发酵剂和/或继代式发酵剂，所述的继代式发酵剂由下述步骤制备，在无菌条件下，将所述的直投式发酵剂以1.0X10⁶CFU/g-1.0X10⁷CFU/g的接种量接种于灭菌脱脂乳或其他发酵基质，37℃-42℃静置发酵至滴定酸度为75°T-90°T，即可，所述的继代式发酵剂的活菌含量较佳地为1.0X10⁸CFU/g-8.0X10⁸CFU/g。