[发明专利]一种检测CYP1A2基因rs762551位点的实时荧光PCR方法及其引物探针组合

说明书

本发明属于基因诊断领域，公开了一种检测CYP1A2基因rs762551位点的实时荧光PCR方法及其引物探针组合。其中：上游引物FpG:5’‑GGTGAGCTCTGTGGGGC‑3’，上游引物FpG:5’‑GGTGAGCTCTGTGGGGA‑3’，下游引物Rp：5’‑GCTGAGGGTTGAGATGGAGAC‑3’，探针Probe：5’‑Cy5‑ACGCATGGTAGATGGAGCTTAG‑BHQ2‑3’。PCR反应完成后，可通过扩增曲线的有无并结合Ct值分析结果。采用本发明所提供的检测方法进行rs762551位点多态性的检测，具有操作简便、分辨率高、无污染、高通量等优点。

技术领域

本发明属于药物基因组学和基因检测领域，具体涉及一种针对CYP1A2基因rs762551位点(CYP1A2*1F，-163C>A)的特异性引物及探针设计、以及检测方法。

背景技术

精神类疾病指严重的心理障碍，患者的认识、情感、意志、动作行为等心理活动均可出现持久的明显的异常，不能正常的生活。在我国精神疾病患者具有不可小觑的数量，截至2017年底，全国精神障碍患者达约2.4亿，总患病率高达17.5％；严重精神障碍患者超1600万人，发病率超过1％。并且这一数字还在逐年增长。目前我国的精神疾病以药物治疗为主，但是仍然处于试误法的阶段，药物疗效和不良反应也呈现出显著的个体差异。在精神分裂患者中，有30％～50％的患者对典型和非典型抗精神病药物的反应不佳。导致药物治疗出现巨大个体化差异的原因，除了传统上的病理、性别、年龄、身高、体重等方面外，遗传因素是影响药物反应差异的重要因素。近年来，药物基因组学得到了飞速发展，不断有研究提出应该通过对药物疗效和不良反应的相关基因检测指导药物的选择和剂量调整，达到个体化治疗的目的。

细胞色素P450 1A2(cytochrome P450 1A2，CYP1A2)是人体内一类重要的药物代谢酶，主要介导抗精神药物氯丙嗪、奥氮平、氯氮平、氟奋乃静在体内的生物转化过程。不同个体，由于其CYP1A2基因的多态性，会影响CYP1A2代谢酶的活性，从而影响抗精神药物在体内的清除，最终导致药物浓度不同，致使药效产生差异。CYP1A2*1F(-163C>A，rs762551)是中国人群中较为常见的变异基因。它可以导致CYP1A2酶活性增强，增加抗精神药物的代谢清除率，降低其血药浓度，可从而使抗精神药物在同等剂量下不能达到有效的治疗效果。rs76255等位基因对抗精神药物的应答及不良反应有影响，携带A等位基因的患者血清药物浓度降低，药物无应答风险增高；C等位基因携带者致使血药浓度升高，发生不良反应的风险增加。Laika B等(2010年)研究显示，相较于野生型基因携带者，CYP1A2*1F/*1F基因型携带者奥氮平药物的血药浓度显著降低。Eap CB等(2004年)研究发现CYP1A2*1F携带者对氯氮平无应答的风险增高(p<0.01)。此外，Tay JK等(2007年)研究表明，在使用氯丙嗪、氟奋乃静时，携带C等位基因的精神分裂症患者发生QT间期延长的风险增高(p＝0.007)。因此，开发一种简便、快速、灵敏的CYP1A2基因rs762551位点的基因分型方法，根据患者的基因型制定个体化的用药方案，对于提高精神分裂症患者的药物疗效，降低药物不良反应，具有重要的临床价值。

扩增阻滞突变系统(Amplification refractory mutation system，ARMS)，又称为等位基因特异性聚合酶链反应(allele-specificpolymerase chain reaction，ASPCR)或特定等位基因的PCR扩增，是一种简单，快速且可靠的方法，用于检测涉及单碱基变化或小缺失的任何突变。ARMS基于序列特异性PCR引物的使用，这些引物仅在样品中包含目标等位基因时才允许扩增，而不会扩增非目标等位基因。在发生ARMS反应后，PCR产物的存在与否可诊断出目标等位基因的存在与否。