[发明专利]一种监测pre-mRNA剪接效率的双报告基因探针及制备方法在审
| 申请号： | 201911193339.7 | 申请日： | 2019-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN110747204A | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 王福;郭镔;郑海锋;解锦荣;陈思;王希楠;施潇蕊;毛文杰 | 申请（专利权）人： | 西安电子科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/52 | 分类号： | C12N15/52;C12N15/63 |
| 代理公司： | 11246 北京众合诚成知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王学芝 |
| 地址： | 710071*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 报告基因 基因片段 剪接 核苷酸序列 分子影像 药物研究 荧光素酶 线性化 无创 制备 分析 筛选 调控 监测 | ||
1.一种监测pre-mRNA剪接效率的双报告基因探针，其特征在于，所述的探针包括载体pcDNA3.1、基因片段A、B、C，所述的基因片段A、B、C按照A-B-C顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组，所述的片段A为Fluc，所述的片段B由exon 1、Intron、exon 2组成，所述的片段C为Rluc。
2.根据权利要求1所述的一种监测pre-mRNA剪接效率的双报告基因探针，其特征在于，所述的片段A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的片段B的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的片段C的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1所述的一种监测pre-mRNA剪接效率的双报告基因探针，其特征在于，所述的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.权利要求1所述的双荧光素酶报告基因影像探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用KpnI和XhoI酶切载体pcDNA3.1，使其线性化；
2)PCR扩增A、B、C片段；
3)基因片段A、B、C按照A-B-C顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组；
4)重组载体经转化、提取质粒、酶切鉴定，获得Dual-Luc报告基因探针。
5.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的片段A为Fluc，所述的片段B由exon 1、Intron、exon 2组成，所述的片段C为Rluc。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中扩增得到的基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
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