[发明专利]小反刍兽疫抗体和抗原胶体金检测方法

说明书

小反刍兽疫抗体和抗原胶体金检测方法，包括；步骤一：制备培养基和溶液：步骤二：样品垫的制备：步骤三：胶体金的制备：步骤四：重组蛋白pGEX‑4T‑V、Nig75/1浓缩病毒和三株单抗的金标记：步骤五：反应膜的制备；步骤六：PPR双抗体和双抗原夹心胶体金试纸条的组装、分切和包装：步骤七：PPR双抗体夹心胶体金试纸条样品的检测：步骤八：PPR双抗原夹心胶体金试纸条样品的检测：步骤九：PPR双抗原夹心胶体金试纸与商品化试剂盒对样品检测的比对。本发明应用金标PPRV V蛋白、Nig 75/1疫苗毒和三株单抗建立的双抗体和双抗原胶体金检测方法，方法操作简单、快速，无需任何仪器，适用于大量临床样品的检测。

技术领域

本发明涉及应用分子生物学检测PPR技术领域，特别涉及小反刍兽疫抗体和抗原胶体金检测方法。

背景技术

现有检测PPRV抗体应用N蛋白的McAb建立的c-ELISA方法；检测PPRV抗原应用的是RT-PCR或荧光定量RT-PCR，应用的靶基因是N基因。上述检测方法耗时、耗力。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明的目的在于提供小反刍兽疫抗体和抗原胶体金检测方法，具有操作简单、快速，无需任何仪器，适用于大量临床样品的检测的特点。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

小反刍兽疫抗体和抗原胶体金检测方法，包括以下步骤；

步骤一：制备培养基和溶液

(1)PBS缓冲液：50mL 20×PBS溶液加双蒸水定容至1L，常温保存备用；

(2)10％HAuCl₄溶液：称取HAuCl₄ 10g，加入到盛有100mL玻璃瓶中，充分混匀4℃保存；

(3)1％Na₃C₆H₅O₇溶液：称取Na₃C₆H₅O₇ 1g，加入到盛有100mL双蒸水的玻璃瓶中，充分混匀4℃保存备用；

(4)0.1M K₂CO₃溶液：称取K₂CO₃ 1.38g，加入到盛有90mL双蒸水的玻璃瓶中，充分混匀定容至100mL备用；

(5)10％BSA溶液：称取BSA 10g，加入到盛有100mL双蒸水的玻璃瓶中，充分混匀4℃保存备用；

(6)0.01M的PB缓冲液：称取Na₂HPO4 2.28g，NaH₂PO₄·2H2O 0.593g溶于900mL双蒸水的中，充分混匀后用1M HCl或NaOH调pH为7.4定容至1L，4℃备用；

(7)C/T线包被液：100mL PB缓冲液里加2g海藻糖，充分混匀后4℃保存备用；

(8)0.05M硼砂：称取硼砂19.07g，加900mL双蒸水搅拌混匀定容至1L，4℃储存备用；

(9)0.2M硼酸：称取12.37g的硼酸溶于900mL双蒸水中，搅拌混匀后定容至1L，4℃储存备用；

(10)0.2M硼酸硼砂缓冲液：量取0.05M的硼砂800mL，0.2M的硼酸200mL，充分混匀后pH值为9.0，4℃储存备用；

(11)样品垫处理液：称取BSA 10g，PEG 4000 20g，吸取Triton X-100 5mL，0.2M硼酸硼砂缓冲液900mL，充分搅拌溶解，混匀后定容至1L，4℃储存备用；