[发明专利]作为生防菌的伯克氏菌的筛选方法及所用的分离培养基

说明书

本发明公开了3种伯克氏菌分离培养基，分别是含抗生素的MEA培养基、含抗生素的PDA培养基、含抗生素的Martin培养基。本发明还同时公开了利用上述伯克氏菌分离培养基进行的作为生防菌的伯克氏菌的筛选方法，包括以下步骤：取抗枯萎病或感枯萎病的植物根系(健康部分)进行冲洗和消毒，得消毒后根系材料；将消毒后根系材料放置于伯克氏菌分离培养基中，黑暗倒置培养；选择对培养过程中同时长出的真菌具有拮抗能力的细菌菌落；该细菌为生防伯克氏菌。本发明解决了针对生防菌伯克氏菌筛选繁琐且效率低下的难题，提供了一种生防菌伯克氏菌的简单、快速、高效的筛选方法。

技术领域

本发明涉及植物生物防治领域，具体涉及一种生防伯克氏菌的筛选方法。

背景技术

伯克氏菌是一种被广泛用在农业上作为生物防治和促进植物生长的根际微生物，具有较强竞争力的根围定殖能力。伯克氏菌作为重要的植物杀菌剂和杀虫剂注册了很多商标，如“Blue Circle”，“Type Wisconsin”，“Deny”，“Capton”。在我国也有注册，如“亚宝”。

生防菌伯克氏菌尚缺乏高效的筛选分离方法，常规的生防菌伯克氏菌的筛选过程繁琐，工作量大、时间长，获得拮抗多种病原真菌的有效伯克氏菌菌株的效率低下。

常规的生防菌伯克氏菌的筛选方法一般采用从土壤中稀释培养，以及从植物叶茎根内生细菌分离方法，都存在获得偶然性、菌株不确定性、拮抗能力未知性。首先，所采用的培养基均为细菌培养基，所采用的培养条件均适合多种细菌的生长，分离获得的大量菌落外形形态极为相似，需要进一步通过分子证据鉴定其确切物种；其次，所分离获得的细菌是否具备拮抗病原菌的能力，也还需要进一步的对峙实验来鉴定，工作量大，成效低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对生防菌伯克氏菌筛选繁琐且效率低下的难题，提供一种生防菌伯克氏菌简单、快速、高效的筛选方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种伯克氏菌分离培养基，为以下任一：

一、含抗生素的MEA培养基：

向(20±1)g麦芽粉、琼脂(20±1)g中加蒸馏水定容至1L，灭菌(为常规的高温灭菌，121℃下灭菌15min)，调节pH至5.6±0.2，再加入硫酸链霉素30～50mg、盐酸四环素30～50mg，得含抗生素的MEA培养基；

二、含抗生素的PDA培养基：

向马铃薯泥(200±10)克、葡萄糖(20±1)克、琼脂15～20克中加蒸馏水定容至1L，灭菌(为常规的高温灭菌，121℃下灭菌15min)，调节pH至5.6±0.2，再加入硫酸链霉素30～50mg、盐酸四环素30～50mg，得含抗生素的PDA培养基；

三、含抗生素的Martin培养基：

向KH₂PO₄ 1g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、蛋白胨(5±0.5)g、葡萄糖(10±1)g、琼脂15-20g中加蒸馏水定容至1L，灭菌(为常规的高温灭菌，121℃下灭菌15min)，调节pH至5.6±0.2，再加入硫酸链霉素30～50mg、盐酸四环素30～50mg，得含抗生素的Martin培养基。

本发明还同时公开了利用上述伯克氏菌分离培养基进行的作为生防菌的伯克氏菌的筛选方法，包括以下步骤：

(1)植物根系材料准备：

取抗枯萎病或感枯萎病的植物根系(健康部分)进行冲洗和消毒，得消毒后根系材料；

说明：如果是感枯萎病植株，需取非腐烂且健康的根系；