[发明专利]TGF-β受体II同种型、融合肽、治疗方法和体外方法

说明书

本发明涉及TGF‑β受体II同种型、融合肽、治疗方法和体外方法。TGFβ受体II的同种型包含约80个氨基酸的序列并且缺乏跨膜结构域。所述同种型包含SEQ ID No.12所示的氨基酸序列。所述同种型可以具有SEQ ID No.2所示的序列或具有与SEQ ID No.2所示序列至少85％的序列同一性的序列。本发明提供了融合肽，其包含与配体融合的TGFβII受体的同种型，其中，包含所述融合肽的载体用于治疗癌症和/或肝纤维化。本发明提供了结合TGFβII受体的可溶性同种型的抗体。该抗体结合SEQ ID No.12所示的氨基酸序列，并用于体外方法。

技术领域

本发明涉及编码多核苷酸、载体、细胞、转化肽和融合肽的TGF-β受体II的同种型、方法和用途。更具体而言，涉及到TGF-β受体II的同种型，其包含约80个氨基酸的序列并且缺乏跨膜结构域。所述同种型包含SEQ ID No.12的氨基酸序列。所述同种型可以具有SEQID No.2所示的氨基酸序列或具有与SEQ ID No.2所示的序列至少85％序列同一性的序列。

背景技术

转化生长因子-β(TGF-β)在骨基质中含量很高，并且在体外和体内显示出调节成骨细胞和破骨细胞的活性。人脂肪来源的间充质基质细胞(ASC)是成骨细胞、成脂细胞和成软骨细胞的前体。因此，最初的研究集中在ASC分泌的对骨重塑具有深远影响的细胞因子(如Tgf-β1)、骨保护素(OPG)和肝细胞生长因子(HGF)。

患有骨关节炎的人的软骨下骨中TGF-β1的浓度很高。高浓度的TGF-β1诱导了巢蛋白阳性间充质干细胞(MSC)簇的形成，导致了骨髓类骨质胰岛的形成，并伴随着高水平的血管生成(Zhen G等，Nat Med.19：704-12，2013)。已发现成骨细胞中活性TGF-β1的转基因表达会诱发骨关节炎，而通过TβRII显性阴性受体抑制软骨下骨中TGF-β的活性减轻了关节软骨的变性，从而导致骨关节炎进展更缓。另据报道，在成骨细胞中表达了显性阴性II型TGF-β受体(TβRII-DN)的小鼠显示出在成骨细胞中降低的TGF-β响应性和增加的骨体积，这表明内源性TGF-β直接作用于成骨细胞以调节骨重塑、结构和生物力学特性(Filvaroff E等，Development，126：4267-4279，1999)。此外，TGF-β还部分地通过诱导骨保护素(OPG)来调节破骨细胞的生成和破骨细胞的存活，OPG是一种已知抑制破骨细胞形成和功能的蛋白质(Thirunavukkarasu K等，J.Biol.Chem.276:36241-36250，2001)。

在骨骼组织中过表达显性阴性II型TGF-β受体(dnTgfbr2)的转基因小鼠表现出进行性骨骼变性(Buckwalter JA等，Clin Orthop Relat Res 423：7-16，2004)。软骨组织浅表区的关节软骨细胞肥大，并伴有X型胶原表达增加。在非常类似于人骨关节炎(OA)(OA样)的6个月大的小鼠中已经观察到蛋白聚糖的损失和软骨组织的进行性退化(Serra R等，JCell Biol 139：541-552，1997)。TGF-β信号传导不仅在软骨破坏过程中调节软骨细胞稳态中起着关键作用，而且在骨赘形成(OA的另一特征)过程中软骨下骨细胞行为的操纵中也起着至关重要的作用(van der Kraan PM等，Osteoarthr Cartilage 15：237-244，2007)。

通过使用特异性TGF-β抑制剂的阻断研究，进一步探索了TGF-β信号通路在骨赘形成中的作用。几组研究表明，通过可溶性TGF-βII型受体细胞外结构域或Smad7的关节内过表达来消除内源性TGF-β活性，可以抑制实验性鼠类OA模型中的骨赘形成(Scharstuhl A等，J Immunol 169：507-514，2002)。这些观察清楚地表明，至少在鼠类OA模型中，TGF-β在诱导骨赘中起主要作用。