[发明专利]一种CHO细胞培养的补料培养基及其制备方法和应用有效
申请号: | 201910617672.X | 申请日: | 2019-07-10 |
公开(公告)号: | CN110343666B | 公开(公告)日: | 2023-05-30 |
发明(设计)人: | 王德朋;王明焱;李美娇;钱瑞鹏;冷春生;常晓慧 | 申请(专利权)人: | 通化东宝药业股份有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12P21/08;C12P21/00 |
代理公司: | 北京瑞恒信达知识产权代理事务所(普通合伙) 11382 | 代理人: | 李琰 |
地址: | 134123 *** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 cho 细胞培养 培养基 及其 制备 方法 应用 | ||
本发明涉及一种CHO细胞培养的补料培养基及CHO细胞培养方法。所述CHO细胞培养的补料培养基包括氨基酸、维生素、氢氧化钠和注射用水,以所述补料培养基的总质量为基准,各组分的质量百分比为:氨基酸4.8%‑19.75%,维生素0.00925%‑0.13%,氢氧化钠1.25%‑5.5%,余量为注射用水;其中,氨基酸包括L‑天冬氨酸、L‑酪氨酸、L‑苏氨酸、L‑色氨酸、L‑谷氨酸;所述维生素包括核黄素、叶酸、维生素B12、生物素、亚硫酸氢钠甲萘醌、盐酸硫胺素和L‑抗坏血酸。本发明提供的补料培养基及细胞培养方法能够优化CHO细胞生长,提高细胞表达目的蛋白的能力。
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种中华仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)培养的补料培养基及其制备方法和应用。
背景技术
CHO细胞(Chinese HamsterOvary Cells,中华仓鼠卵巢细胞)是广泛应用的哺乳动物细胞表达系统,已上市、进入临床和临床前研究阶段的大部分治疗性单克隆抗体采用该表达系统进行生产。培养基是CHO细胞生长、产物表达的物质基础。根据加入时机及目的不同,培养基可分为基础培养基和补料培养基,其中基础培养基主要用于细胞早期增殖阶段,补料培养基主要用于早期增殖和表达阶段。因为含有动物血清(如胎牛血清等)的培养基有多种不利因素,因此目前在CHO细胞培养中普遍使用的是无血清培养基。但是由于无血清培养基对于细胞的生长、表达的促进功能有限,所以补料技术现在已经各大生物制药企业竞争的重点之一。
商品化补料培养基长期被国外生物技术公司(如Thermo Fisher公司、Sigma公司、Invitrogen公司、JRH Biosciences公司等)和医药巨头所垄断,价格一般在每升800~2500元。这对于蛋白质药物研发和生产企业无疑是巨大的成本压力。
补料培养基的基本成分虽然都包括氨基酸、维生素、无机盐等,但是商品化补料培养基的具体组成成分及配比属于各个公司的商业秘密。不同细胞株、不同克隆之间代谢需求经常存在差异,需要选择适合的补料培养基。当补料培养基的营养成分发生变化时,蛋白质的结构、糖型分布、聚体情况、电荷变异情况、宿主蛋白/DNA含量等关键质量属性(Critical QualityAttributs,CQAs)都有可能变化,从而影响表达的蛋白质的质量。显然,在成分未知的商品化补料培养基中进行筛选,存在着很大的盲目性:不仅会影响生物仿制药的开发进程,也增大了研发和生产的成本。
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