[发明专利]一种LA-GFLG-DOX偶联物及其制备方法与用途

权利要求书

1.一种LA-GFLG-DOX偶联物，其特征在于，该偶联物为硫辛酸-甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-甘氨酸-阿霉素分子通过酰胺键顺次连接，其结构式如式(Ⅰ)所示：

。

2.一种LA-GFLG-DOX偶联物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过缩合反应合成全保护的四肽化合物R₁-GFLG-R₂，具体为Boc-GFLG-OMe，其中GFLG为甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-甘氨酸即Gly-Phe-Leu-Gly，Boc为叔丁氧羰基，OMe为甲氧基；在缩合反应中每个氨基酸的氨基端均以叔丁氧羰基Boc保护，并在酸性条件下脱除；羧基端均以甲氧基OMe保护，并在碱性条件下脱除，通过酰胺键将四个氨基酸连接得到Boc-GFLG-OMe；

(2)将Boc-GFLG-OMe溶解后加入等体积的三氟乙酸，室温搅拌，反应液旋干；将硫辛酸和N,N’-羰基二咪唑溶解后在氮气保护下搅拌得到羧基端活化的硫辛酸LA；氮气保护下，将活化的硫辛酸LA溶液与GFLG-OMe混合，反应结束后萃取得到目标产物LA-GFLG-OMe；

(3)LA-GFLG-OMe溶解于甲醇，加入碱性溶液，室温搅拌，调节反应溶液pH至中性，以旋转蒸发仪旋干甲醇；旋干后的反应物溶解于超纯水，乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层并旋干，得到LA-GFLG-OH；

(4)LA-GFLG-OH溶解于四氢呋喃，继续加入N-羟基丁二酰亚胺，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，冰浴条件下加入至茄瓶中，反应过夜；反应液以旋转蒸发仪旋干除去溶剂，剩余物重新加入二氯甲烷溶解，转移至分液漏斗，二氯甲烷层水洗三次，旋干得到黄色油状物；阿霉素DOX盐酸盐溶解于N,N-二甲基甲酰胺，加入黄色油状物，室温避光搅拌；反应结束后，反应液以三氟乙酸水溶液稀释，二氯甲烷萃取，得到的二氯甲烷层旋干，得到LA-GFLG-DOX偶联物。

3.如权利要求2所述的一种LA-GFLG-DOX偶联物的制备方法，其特征在于，LA在氮气保护下对其羧基端活化，与GFLG的氨基端连接，得到LA-GFLG，接下来再次对GFLG中甘氨酸的羧基端活化，与DOX连接，得到LA-GFLG-DOX。

4.如权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述硫辛酸和N,N’-羰基二咪唑的摩尔比为1:1-1:1.5；所述在氮气保护下搅拌时间为1.5h-4h；步骤(2)中还包括将活化的硫辛酸LA溶液与GFLG-OMe混合后，以N,N-二异丙基乙胺调节pH值在8-9，室温搅拌过夜；步骤(4)中LA-GFLG-OH与N-羟基丁二酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1-1:1.5和1:1-1:1.5；LA-GFLG-OH与阿霉素盐酸盐的摩尔比为1:0.3-1:0.5。

5.如权利要求2或4所述制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述碱性溶液选自碱金属的氢氧化物或碳酸盐。

6.如权利要求1所述的LA-GFLG-DOX偶联物的在制备抗肿瘤药物中的用途。