[发明专利]沙蚕精液胞浆素及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种沙蚕精液胞浆素及其制备方法与应用。本发明对沙蚕精液胞浆素提取方法进行改进，提供了一种沙蚕精液胞浆素的制备方法，该方法制备的沙蚕精液胞浆素抑菌效果较强，并以此作为主要抑菌物质制备成沙蚕精液胞浆素栓剂、凝胶剂和软胶囊。

技术领域

本发明涉及一种沙蚕精液胞浆素及其制备方法与应用，属于生物制药技术领域。

背景技术

妇科炎症是临床上常见病、多发病，常见的妇科炎症主要有阴道炎、宫颈炎、盆腔炎等，多为细菌、真菌、念珠菌、衣原体等病原体的感染，少为几种病原体的混合感染，且患者多数伴有免疫能力降低，而目前临床上常用的妇科炎症治疗药物一般只对其中一种或两种病原体有作用。而本发明对几种病原菌均有作用，从而对治疗妇科炎症有着更好作用。精液胞浆素是精液中的一种杀菌物质，本质为一类具有杀菌活性的蛋白质。

性成熟的沙蚕其体腔内为配子所充盈，外观十分饱满。在显微镜下可观察到体腔内的精子交错缠绕成束，在精子形成过程中，在精母细胞的细胞器中，高尔基体活性较低，多泡体有磷酸酶的活性，其在体外具有较强的溶菌活性，磷酸酶随精子逐渐释放到体外。

目前临床上常用的阴道栓剂的抑菌物质主要为抗生素，滥用抗生素栓剂治疗，会使病情加重。比如急性滴虫、真菌感染时，不能用腐蚀性的阴道栓剂；如果是急性阴道炎，用抗生素栓剂可促使炎症扩散。过多使用抗生素会使病菌产生耐药性，破坏阴道菌群间平衡，使治疗周期不断延长，特别是真菌感染用抗生素会加重感染症状。

本发明利用精液胞浆素作为药物制剂的主要抑菌物质。精液胞浆素不但对细菌和各种病原微生物有效，还具有增强免疫能力的作用，在用于治疗妇科炎症时，本发明可对妇科炎症予以治疗，对于妇科疾病的疗效有着积极的意义。通过从患者的阴道给药，药物直接作用于病变部位，避免口服给药可能产生的肝脏首过效应、对胃肠道的刺激性及静脉给药可能产生的血管黏膜刺激性，目前尚无有精液胞浆素阴道制剂的报道。

发明内容

为更佳高效地制备沙蚕精液胞浆素，提高抑菌效果，本发明对现有制备方法进行了改进，提供一种沙蚕精液胞浆素的制备方法。采用本发明方法制备的沙蚕精液胞浆素抑菌活性强，可进一步制成栓剂、凝胶剂、软胶囊等剂型，方便用药。

本发明技术方案如下，一种沙蚕精液胞浆素的制备方法，包括以下步骤：

取沙蚕精液或雄性沙蚕匀浆，低温离心，获得上清液；

向所得上清液中加入氯化钠解离，超滤，硫酸铵分级盐析沉淀；

所述硫酸铵分级盐析沉淀为先向所得超滤液中加入硫酸铵，使其浓度达到25％-30％(指硫酸铵在所述超滤浓缩液中的质量分数，下同)，盐析，去除沉淀；保留上清液，继续加入硫酸铵，使其浓度达到40％-50％，盐析，收集沉淀，得粗提物；

将所得粗提物采用高速逆流色谱法分离，收集活性组分，添加硫酸铵盐析，收集沉淀，冷冻干燥，获得沙蚕精液胞浆素。

若无特殊指明，本发明所述低温离心一般是指在4℃左右，4000r/min离心40min左右。

进一步地，向所得上清液中加入氯化钠解离时是使氯化钠浓度达到3.0％-4.0％(指氯化钠在所述上清液中的质量分数)。解离时间一般为2.0-3.0h。可以通过搅拌处理加速盐析过程。本发明研究发现，通过加入氯化钠解离可以提高沙蚕精液胞浆素的抑菌活性，并且其活性在一定范围内随着氯化钠添加量的增加而升高，有利于结合的精液胞浆素游离到氯化钠盐溶液中。较佳的氯化钠添加量是氯化钠在所述上清液中的质量分数(浓度)为3.0％-4.0％。

进一步地，所述超滤浓缩是指将氯化钠解离后的含精液胞浆素的上清液用超滤系统进行处理，优选用膜截留分子量为20-40kD的滤膜超滤，收集超滤液。通过超滤可以截留分子量较大的蛋白，使精液胞浆素通过滤膜，起到纯化的精液胞浆素的作用。然后可进一步用截留分子量为1-5kD的滤膜进行浓缩，例如浓缩5-8倍。超滤可在在压力0.2-0.5MPa条件下进行。