[发明专利]一种猪伪狂犬病病毒高免血清的制备方法

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒高免血清的制备方法，其特征在于：它是以猪为免疫对象，使用灭活疫苗进行一次基础免疫和两次加强免疫，再用猪伪狂犬病病毒进行一次攻毒后，采集血清，即得；

所述疫苗含有免疫增强剂；

所述免疫增强剂是由0.9％氯化钠缓冲液中加入干扰素α、干扰素β、黄芪多糖和巨噬细胞集落刺激因子配制成水相后，与吐温-60混合乳化制得；所述水相和吐温-60的体积比是(8～10)∶1；

每毫升所述水相含有0.1～100mg干扰素α、0.1～100mg干扰素β、0.1～200mg黄芪多糖和0.1～100mg巨噬细胞集落刺激因子。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述水相中含有50mg/ml干扰素α、50mg/ml干扰素β、200mg/ml黄芪多糖和10mg/ml巨噬细胞集落刺激因子。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水相和吐温-60的体积比是9∶1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述灭活疫苗是使用1体积份的免疫增强剂、49体积份灭活病毒和50体积份弗氏佐剂乳化混合而成。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述弗氏佐剂在基础免疫时为弗氏完全佐剂，加强免疫时为弗氏不完全佐剂。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述猪伪狂犬病病毒为该病毒的JS-2012株、Bartha-k61株、HB-98株、HB2000和/或JS-A1株。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括血清纯化步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述血清纯化步骤为：

(1)0.45微米滤器过滤澄清，收集样品约95ml；

(2)准备纯化用缓冲液：缓冲液A、B和C；

(3)用缓冲液A平衡柱体至基线；

(4)上样，缓冲液A再平衡至基线；

(5)用缓冲液B洗脱至基线，每5ml收集样本1次，直到洗脱至基线。收集后的样品中加入1/10体积缓冲液C进行中和。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述缓冲液A含有0.15M NaCl和20mM磷酸盐，pH＝7.0；所述缓冲液B含有0.1M甘氨酸，pH＝3.0；所述缓冲液C含有1M的Tris-HCl，pH＝8.0。