[发明专利]一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法

权利要求书

1.一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）聚N-异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖大分子的制备：按重量计，将1-20份壳聚糖、0.1-2份酸、0.01-8份引发剂、1-20份N-异丙基丙烯酰胺单体、50-98份去离子水加入反应器中，搅拌溶解均匀后，在60^oC反应1-12小时，然后使用去离子水将反应产物透析至中性，真空冻干得到聚N-异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖粉末；所述的酸为盐酸；

2）聚N-异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖水溶液的制备：将1-20份1）中的聚N-异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖粉末加入80-99份PBS溶液中，室温下搅拌溶解均匀后得到聚N-异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖溶液，简称水凝胶溶液；

3）非胰酶消化收获细胞培养：将细胞悬液和步骤2）制备的水凝胶溶液在较低温度下混合均匀后加入培养皿中，然后置于37^oC细胞培养箱中，混合液迅速形成凝胶后加入37^oC的培养基进行培养，经培养后将培养物转移到室温下降低培养温度，细胞被释放后离心分离；所述的较低温度为10-28^oC；

或者，将步骤2）制备的水凝胶溶液在较低温度下涂在培养皿底面，然后置于37^oC细胞培养箱中，待形成凝胶后将37^oC的细胞悬液和培养基混合溶液加入培养皿中进行培养，经培养后将培养物转移到室温下降低培养温度，细胞被释放后离心分离；所述的较低温度为10-28^oC。

2.如权利要求1所述的一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法，其特征在于：所述的壳聚糖分子量为3万-150万，脱乙酰度为50%-95%。

3.根据权利要求1所述的一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法，其特征在于，所述的引发剂为过硫酸铵或过硫酸钾。

4.根据权利要求1所述的一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法，其特征在于，所述的细胞为贴壁细胞。