[发明专利]非天然碱基对组合物及使用方法

权利要求书

1.一种工程化宿主细胞，所述工程化宿主细胞包含：

a.包含非天然核苷酸的第一核酸分子；以及

b.任选地，编码修饰的转座相关蛋白或可转座元件的第二核酸分子。

2.根据权利要求1所述的工程化宿主细胞，其还包含：

a.编码修饰的核苷三磷酸转运蛋白的第三核酸分子，其中所述第三核酸分子被掺入所述工程化宿主细胞的基因组序列中，或者包含编码所述修饰的核苷三磷酸转运蛋白的质粒。

3.根据权利要求1所述的工程化宿主细胞，其中如与在不包含编码所述修饰的转座相关蛋白的所述第二核酸分子的等同工程化宿主细胞中的表达相比，所述修饰的核苷三磷酸转运蛋白在所述工程化宿主细胞中展现增加的表达稳定性。

4.根据权利要求2所述的工程化宿主细胞，其中所述修饰的核苷三磷酸转运蛋白包含编码所述核苷三磷酸转运蛋白的整个核酸分子的缺失、N末端截短、C末端截短或两个末端的截短。

5.根据权利要求2所述的工程化宿主细胞，其中修饰的核苷三磷酸转运蛋白包含来自三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的核苷三磷酸转运蛋白(PtNTT₂)。

6.根据权利要求5所述的工程化宿主细胞，其中所述PtNTT₂在选自pSC质粒的启动子或来自lac操纵子的启动子的控制下。

7.根据权利要求2所述的工程化宿主细胞，其还包含：

a.Cas9多肽或其变体；以及

b.包含crRNA-tracrRNA支架的单一指导RNA(sgRNA)，其中Cas9多肽或其变体与sgRNA的组合调节编码所述非天然核苷酸的所述第一核酸分子的复制。

8.根据权利要求1所述的工程化宿主细胞，其中所述第二核酸分子包含含有过氧化氢酶(cat)、IS1蛋白insB-4(insB-4)、IS1蛋白insA-4(insA-4)或其组合的基因。

9.根据权利要求1所述的工程化宿主细胞，其中所述修饰的转座相关蛋白包含插入元件IS1 4蛋白InsB、插入元件IS1 4蛋白InsA或其组合；并且其中所述修饰的可转座元件包含IS1。

10.根据权利要求8所述的工程化宿主细胞，其中所述基因包含一个或多个缺失，其中所述一个或多个缺失包含N末端缺失、C末端缺失、两个末端的截短、内部缺失和/或整个基因的缺失。

11.根据权利要求1所述的工程化宿主细胞，其还包含编码修饰的DNA修复反应相关蛋白的第五核酸分子，其中所述DNA修复反应包括重组修复、SOS反应、核苷酸切除修复或甲基定向的错配修复或其组合。

12.根据权利要求11所述的工程化宿主细胞，其中所述修饰的DNA修复反应相关蛋白包含RecA、Rad51、RadA或LexA或其组合。

13.根据权利要求1所述的工程化宿主细胞，其中所述工程化宿主细胞是原核细胞，包括大肠杆菌细胞、大肠杆菌BL21(DE3)细胞。