[发明专利]根结线虫会阴花纹快速制片方法

权利要求书

1.根结线虫会阴花纹快速制片方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)挑取并转移雌虫：用2号昆虫针从根结线虫受害根部挑取出根结线虫的雌虫，拨入水中，然后转移1个以上的雌虫至塑料培养皿中待用；

(2)在解剖镜下，用昆虫针将水滴中的雌虫拨到水滴外面，然后用11号解剖刀，一刀斜切切下带有雌虫尾部完整会阴花纹的五分之一至二分之一虫体，之后用昆虫针或挑针将带有会阴花纹的部分虫体转移到质量分数60％乳酸溶液中；所述斜切的位置为：雌虫头端到尾端的中轴线上，尾端会阴花纹在中轴线上的靠近头端的边缘点为A点，中轴线的中点为B点，在A点和B点中任选一点为切割点O点，在O点处将中轴线向左或向右偏移30～90度，确保保留完整会阴花纹，作为切割线，沿切割线进行斜切，切下带有雌虫尾部完整会阴花纹的五分之一至二分之一虫体；

(3)清理：将切口向下或向侧面，用昆虫针按压上述带有会阴花纹的虫体表皮1～5次，虫体中的内容物会快速释放，10～60秒即可清理干净内容物；

(4)用昆虫针或挑针将上述已清理干净的带有会阴花纹的虫体表皮转移到甘油滴中，在放大30-40倍的解剖镜下，使带有会阴花纹的表皮表面朝上，用11号解剖刀沿花纹边缘切割，除去多余不含有花纹的表皮，保留完整会阴花纹部分，得到含有完整会阴花纹的小块表皮；

(5)取一干净载玻片，在中间加一小滴甘油，在解剖镜下用挑针将上述含有完整会阴花纹的小块表皮转移至甘油滴的中央，表皮表面向上，压沉紧贴载玻片，加盖玻片，用封片剂封片，制作得到根结线虫会阴花纹永久玻片。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)按照以下步骤操作：将受害根放在带水的培养皿中，置解剖镜下，将根结表面用镊子或解剖针针尖轻轻拨开，剖面上乳白色的光滑球状物即为根结线虫的雌虫，用2号昆虫针将球状物轻轻拨入水中，用200微升移液器，将枪头用刀片切去少许，即可将1个以上的白色雌虫转移到7-10cm塑料培养皿中。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，解剖镜的放大倍数为10～20倍。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，清理时将昆虫针针尖部分的1～1.5mm处弯曲45度，使针尖成135度角，可获得更好的清理效果。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(5)中按以下步骤操作：取一干净载玻片，在中间加一小滴甘油，在解剖镜下用挑针将上述含有会阴花纹的小块表皮转移至甘油滴的中央，往下压沉紧贴载玻片，然后确认此表皮表面向上，在甘油滴两边对称放两块小蜡块，加盖玻片，置于64℃的加热板上加热20～40s，待蜡块融化后自然冷却，制作得到根结线虫会阴花纹永久玻片。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(5)中，挑针为线虫挑针，按以下方法制作：取尖毛尼龙牙刷毛一根和1000毫升移液器塑料枪头一个，将该枪头在酒精灯上烧约1～3秒，使得枪头略融化，立即将该牙刷毛的根部约3-5毫米插入已经烧软的枪头处，即可制成线虫挑针。