[发明专利]检出准确度鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序

说明书

本发明涉及检出准确度鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序。提供了用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，该方法包括利用包含已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率，鉴定测试目标核酸的检出准确度能力。

发明领域

本公开涉及检出准确度(detection accuracy)鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序。

发明背景

近年来，分析技术的灵敏度增加已能够实现测量目标以分子数量为单位的测量，并且已需要检出痕量核酸的基因检出技术对食品、环境审核、和医疗保健的工业应用。具体地，对病原体或未经批准的遗传修饰食品的检出通常是为了确认在样品中是不存在的，并且需要高水平的检出准确度。

例如，基于利用分子生物学研究领域中常用的以聚合酶链反应(PCR)为代表的核酸扩增的核酸检出方法的技术特点，核酸检出方法据称即使在仅有一个核酸分子的情况下理论上也能够扩增核酸。

在通过定量分析检出这种痕量基因时，需要利用标准试剂，并且已提出通过限制稀释方法和基于所得稀释溶液的实时PCR结果选择包括预期分子数量的稀释溶液来稀释具有特定碱基序列的DNA片段的方法(例如，参见日本未审查专利申请公开号2014-33658)。甚至在仅判定检出有无的定性分析中，检出下限(LOD：检出极限)的计算对于测试有效性的确认也很重要。已报道了计算一般测试的LOD的方法(例如，参见Chronicles of YoungScientists Vol.2，|Issue|Jan-Mar 2011[在线]，＜https：//cysonline.org，2015年6月1日，星期一)。然而，核酸检出方法或装置的LOD是某些拷贝的水平。由于难以生成稳定的标准物质(其中拷贝数是某些拷贝的水平)，难以测量出正确的LOD。

关于这点，已提出了这样的方法：通过基因重组技术在细胞中引入特定拷贝数的DNA片段，培养细胞，和分离培养的细胞，以生成包含预期拷贝数的DNA片段的标准试剂(例如，参见日本未审查专利申请公开号2015-195735)。然而，还没有提出利用此方法计算LOD的方法。

进一步，还考虑到样品自身的差异，报道了重复特定浓度下的测试和计算该特定浓度的检出概率(POD)的方法(参见Journal of AOAC International，Volume 94，Issue1，pp.335-347)。

本公开的一个目的是提供能够高度准确地鉴定检出少量核酸分子的检出准确度能力(LOD：检出极限)的检出准确度鉴定方法。

发明内容

本公开的检出准确度鉴定方法是用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，并且包括检出准确度能力(detection accuracy ability)鉴定步骤：利用包含已知数量的核酸分子(a known number of nucleic acid molecule)的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率，鉴定测试目标核酸的检出准确度能力。

本公开可提供能够高度准确地鉴定检出少量核酸分子的检出准确度能力(LOD：检出极限)的检出准确度鉴定方法。

附图说明

图1A是示例通过对已知数量(1至4个)的核酸分子进行核酸扩增和检出和计算检出概率(％)而获得的检出结果实例的图；

图1B是基于图1A的结果对每种分子数量的核酸检出概率作图的直方图；

图2是对样品中每种核酸分子数量的泊松(Poisson)分布的实例作图的直方图；

图3是对表示未检出样品中的核酸的未检出概率的检出准确度能力的实例作图的曲线；

图4是对表示未检出样品中的核酸的未检出概率的检出准确度能力的实例作图的曲线；