[发明专利]一种快速的灭菌效果评价方法

说明书

本发明涉及一种快速的灭菌效果评价方法，属于灭菌技术领域。本发明所述评价方法，包括以下步骤：1)将菌液滴加到不锈钢片上，涂匀后晾干，得到灭菌指示片；所述灭菌指示片上菌总数不低于10⁶cfu/cm²；2)将步骤1)得到的灭菌指示片进行灭菌，将灭菌后的灭菌指示片在洗脱液中浸泡，洗脱，得到灭菌洗脱液；3)将步骤2)得到的灭菌洗脱液与混染试剂混合进行荧光染色，得到染色后菌液；所述混染试剂包括活菌染色试剂和死菌染色试剂；4)将步骤3)得到的染色后菌液进行过滤，得到含菌滤膜；5)对步骤4)得到的含菌滤膜进行荧光检测，根据死菌和活菌数量，得到灭菌率。本发明所述方法能够实现灭菌效果和灭菌率快速准确的评价。

技术领域

本发明涉及灭菌技术领域，具体涉及一种快速的灭菌效果评价方法。

背景技术

灭菌效果的评价方法主要分为三大类：化学方法、物理方法和生物方法，其中生物方法是最为直接评判灭菌效果的方法。生物法评价灭菌效果的原理是将含有微生物芽孢的生物指示剂暴露于某种选定的灭菌剂或灭菌方法中，然后将暴露处理过的芽孢置于能够维持芽孢发芽和微生物生长的培养环境中，从而确定暴露处理过的芽孢的存活率。

生物法检测灭菌效果方法具体可分为两类：pH检测法和活菌培养计数法。pH检测法主要使用的是溴甲酚紫蛋白胨培养基，其中溴甲酚紫就是常用的酸碱指示剂；活菌培养计数法主要使用的常规培养基胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)和胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)。

pH检测法是依据芽孢恢复生长时，新陈代谢产生酸性代谢产物引起培养基pH变化，通过添加pH指示剂如溴甲酚紫，根据其颜色变化来判读结果，微生物培养时间为24～48h，pH检测法结果可靠，但耗时过久，无法实现快速判读；且pH检测法只能判断灭菌是否成功，无法获得准确的灭菌率。

活菌培养计数法是将待测样品经过适当的稀释后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的的稀释液接种到平板上，经过培养，由单个细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌量。此方法能够获得活菌信息，但是操作繁琐，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受很多因素的影响，如操作不当造成的污染、培养温度不当造成的细菌的死亡等。

现有的生物法测试灭菌效果准确度低，且检测结果需经过一段时间才能获得，无法实现快速判读。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速的灭菌效果评价方法。本发明提供的评价方法能够解决现有技术存在的评估耗时较长、准确度不高的问题，实现快速准确的评价灭菌效果(灭菌率)。

本发明提供了一种快速的灭菌效果评价方法，包括以下步骤：

1)将菌液滴加到不锈钢片上，涂匀后晾干，得到灭菌指示片；所述灭菌指示片上菌总数不低于10⁶cfu/cm²；

2)将步骤1)得到的灭菌指示片进行灭菌，将灭菌后的灭菌指示片在洗脱液中浸泡，洗脱，得到灭菌洗脱液；

3)将步骤2)得到的灭菌洗脱液与混染试剂混合进行荧光染色，得到染色后菌液；所述混染试剂包括活菌染色试剂和死菌染色试剂；

4)将步骤3)得到的染色后菌液进行过滤，得到含菌滤膜；

5)对步骤4)得到的含菌滤膜进行荧光检测，根据死菌和活菌数量，得到灭菌率。

优选的是，步骤1)所述菌包括枯草芽孢杆菌和/或白色葡萄球菌。

优选的是，步骤1)所述菌液的浓度不低于2.0×10⁷cfu/mL。

优选的是，步骤2)所述灭菌的方法包括气体表面灭菌法。