[发明专利]一种病毒核酸提取试剂盒及提取方法在审
| 申请号： | 201810867325.8 | 申请日： | 2018-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN108753767A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 陈永恒;谭杰峰;宋卉 | 申请（专利权）人： | 广州奕昕生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;宋静娜 |
| 地址： | 510663 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒核酸 漂洗液 高氯酸钠 提取试剂盒 无水乙醇 裂解液 洗脱液 避免污染 发明试剂 试剂配方 提取效率 蛋白酶K 试剂盒 体积比 溶剂 乙醇 磁珠 优化 | ||
1.一种病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，包含以下组分：裂解液、漂洗液1、漂洗液2、洗脱液、蛋白酶K和磁珠；
所述裂解液包含以下浓度的组分：1.0～5.0mol/L高氯酸钠、10～200mmol/L Tris-HCl、1～50mmol/L EDTA和50～100uL/mL Triton X-100；所述Tris-HCl的pH值为7.5～8.5，EDTA的pH值为7.5～8.5；
所述漂洗液1为2.0～5.0mol/L高氯酸钠溶液，且所述高氯酸钠溶液的溶剂为70～80％乙醇；
所述漂洗液2包含以下组分：DEPC水和无水乙醇，且所述DEPC水和无水乙醇的体积比为(3～4)：(6～7)；
所述洗脱液为8～12mmol/L Tris-HCl-DEPC水溶液，且pH值为7.5～8.5。
2.根据权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液包含以下组分：1.74mol/L高氯酸钠、35mmol/L Tris-HCl、7mmol/L EDTA和70uL/mL Triton X-100；所述Tris-HCl的pH值为8.0，EDTA的pH值为8.0。
3.根据权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液1为2.0mol/L高氯酸钠溶液，且所述高氯酸钠溶液的溶剂为75％乙醇。
4.根据权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液2中DEPC水和无水乙醇的体积比为3:7。
5.根据权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为10mmol/LTris-HCl-DEPC水溶液，且pH值为8.0。
6.根据权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K的浓度为15～25mg/mL；所述磁珠为二氧化硅磁珠。
7.利用权利要求1～6任一项所述病毒核酸提取试剂盒进行病毒核酸提取的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)向提取容器中依次加入蛋白酶K、待提取样本、裂解液和磁珠，混合均匀进行裂解；
(2)向步骤(1)获得的裂解液中加入漂洗液1，混合均匀，弃液体，保留磁珠；
(3)向步骤(2)获得的磁珠中加入漂洗液2，混合均匀，弃液体；重复漂洗一次，弃液体，保留磁珠；
(4)向步骤(3)获得的磁珠中加入洗脱液进行洗脱，弃磁珠，即得所述病毒核酸。
8.根据权利要求7所述的病毒核酸提取的方法，其特征在于，所述步骤(1)中蛋白酶K、待提取样本、裂解液和磁珠的体积比为5:20:40:1。
9.根据权利要求7所述的病毒核酸提取的方法，其特征在于，所述步骤(1)中裂解条件为：于50～60℃裂解10～30min。
10.根据权利要求7所述的病毒核酸提取的方法，其特征在于，所述步骤(4)中洗脱条件为：于50～60℃洗脱5～15min。
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