[发明专利]用于鉴定土耳其扁谷盗的实时荧光PCR引物及探针

说明书

本发明公开了一种用于鉴定土耳其扁谷盗的实时荧光PCR引物及探针。本发明提供了用于鉴定土耳其扁谷盗的组合物，由一个引物对和一个探针组成的组合物；所述引物对由引物1和引物2组成，所述引物1的序列如SEQ ID No.1所示，所述引物2的序列如SEQ ID No.2所示；所述探针的序列为SEQ ID No.3。本发明所提供的鉴定土耳其扁谷盗的实时荧光PCR方法具有操作简便、耗时较短、特异性强、灵敏度高且较稳定，结果直观等特点，为进一步鉴定扁谷盗属近缘种的研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于鉴定土耳其扁谷盗的实时荧光PCR引物及探针。

背景技术

实时荧光PCR分子鉴定技术是一种使用特异引物和荧光探针对样品DNA进行PCR扩增，通过监测反应体系中荧光信号的有无及强度，判断目标DNA的有无，从而达到种类鉴定的目的的分子鉴定技术。

TaqMan探针是一种在实时荧光PCR鉴定中常用的荧光探针。TaqMan是一段5’端标记一个荧光报告基团，3’端标记一个荧光猝灭基团的寡核苷酸，通常与设计得到的特异引物组合进行DNA的分子鉴定。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被猝灭基团吸收；PCR扩增时，由于TaqMan探针较高的退火温度，先结合到目标序列上，随后引物结合，Taq酶的5’-3’核酸外切酶活性将探针酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。随着反应的进行，体系中的荧光信号逐渐积累并被检测。当扩增产物的荧光信号与背景荧光信号的差值达到认为设定的荧光阈值ΔR时所经过的循环次数称为Ct值。通过生成的扩增曲线形状及仪器检测到的各体系Ct值，对扩增的有无及效率进行判断。

传统的扁谷盗分类鉴定方法都是建立在其成虫外部形态特征的基础上的。但由于扁谷盗类储粮害虫形态上的特殊性，使得对其的准确鉴定尤为困难：扁谷盗属某些种类个体微小(体长通常小于2mm)，种间的外部形态极为相似，常常伴随多种混生，使得其成虫的形态学鉴定极为困难；为了正确地鉴定种，除外部形态之外，必须观察成虫的外生殖器骨片，此过程复杂，操作难度高；在实际的口岸检疫及粮仓采样中，获得的成虫常常不完整，伴随着如触角、足等重要形态学鉴定特征的缺失，这就使得基于成虫特征的形态学鉴定无法顺利进行；目前还没有建立对扁谷盗类储粮害虫卵和幼虫进行形态学鉴定的方法，对于非成虫阶段的扁谷盗样品，依赖于成虫形态特征的鉴定无法进行；此外，生存环境对其外部表型又有一定的影响。

现有的分子鉴定技术有DNA条形码鉴定技术和基于DNA条形码的特异引物PCR技术。然而，DNA条形码鉴定技术需要对PCR扩增产物进行测序比对，耗时长。基于DNA条形码的特异引物PCR技术在对经特异引物常规PCR扩增的产物进行检测时，样品间可能产生交叉污染，从而引发假阳性问题。

发明内容

为了有效解决上述技术问题，本发明提供了一种用于鉴定土耳其扁谷盗的实时荧光PCR引物及探针。

第一方面，本发明要求保护一种用于鉴定土耳其扁谷盗的组合物。

本发明所提供的用于鉴定土耳其扁谷盗的组合物，由一个引物对和一个探针组成的组合物；所述引物对由引物1和引物2组成，所述引物1的序列如SEQ ID No.1所示，所述引物2的序列如SEQ ID No.2所示；所述探针的序列为SEQ ID No.3。

其中，所述组合物中的所述引物1、所述引物2和所述探针分别单独包装。

第二方面，本发明要求保护一种用于鉴定土耳其扁谷盗的探针。

本发明所提供的用于鉴定土耳其扁谷盗的探针，其具体序列为SEQ ID No.3。

在第一方面和第二方面中，所述探针的5’端可标记有报告荧光染料A，3’端可标记有淬灭荧光染料B。

在本发明的具体实施方式中，所述报告荧光染料A具体为FAM；所述淬灭荧光染料B具体为BHQ。