[发明专利]分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体和应用

说明书

本发明涉及一种分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体和应用，包括杂交瘤细胞株4G2和4E7，于2017年12月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号分别为CGMCC NO.15199和CGMCC NO.15198；本发明还提供了上述杂交瘤细胞株分泌的抗CST1单克隆抗体；本发明提供的两种单克隆抗体可用于样品中CST1蛋白的检测，且特异性强、灵敏度高；两种单克隆抗体特异识别CST1的不同区段，可通过配对检测体液、组织中人半胱氨酸蛋白酶抑制剂SN CST1含量，应用于检测CST1蛋白过量表达或诊断以CST1蛋白异常表达为表征的疾病的产品的应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株，还涉及由该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体和应用。

背景技术

半胱氨酸蛋白酶抑制剂SN(CST1)是人类半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员，由CST1基因编码的含141个氨基酸的蛋白质，分子量为16.4Kda。CST1分子中含有两个二硫键，为典型的分泌蛋白，分布于体液和分泌物中，如眼泪、唾液、血清、血浆等。

随着对肿瘤发病机理研究的不断深入，发现CST1作为组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶的内源性抑制剂家族成员之一，在肿瘤的发生、发展、浸润和转移过程中起着非常重要的作用。

研究结果显示，半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员在不同肿瘤中的表达水平有所上升，例如Cystatin C在卵巢癌和头颈部癌症中的表达有不同水平的上升，Cystatin A在非小细胞肺癌中的表达水平有所增加。据报道CST1能够用于食管癌、肺癌、乳腺癌中均有异常表达。CST1的定量检测具有重要的临床意义。现有CST1检测体系中多采用多克隆抗体；抗体特异性差，不能区分CST1高度同源家族蛋白，由于其抗体本身效价或特异性的原因，也使得其对CST1检测的临床效用受到局限，降低了样本检测的特异性，同时也对灵敏度产生一定的影响。因此急需获得特异性识别CST1蛋白单克隆抗体，满足临床样本检测要求，提高检测的灵敏度和特异性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株；本发明的目的之二在于提供分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体；本发明的目的之三在于提供含有所述单克隆抗体的试剂盒；本发明的目的之四在于提供所述单克隆抗体在制备检测CST1蛋白试剂中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株4G2和4E7，保藏于北京中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号分别为CGMCC NO.15199和CGMCC NO.15198。

2、所述分泌抗CST1单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

优选的，所述单克隆抗体的抗原表位处于CST1蛋白的C端或CST1蛋白的M段，处于CST1蛋白的C端的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；处于CST1蛋白的M段的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。

3、含有所述单克隆抗体的试剂盒。

优选的，所述试剂盒包括有所述单克隆抗体的酶标板、校准品CST1蛋白、辣根过氧化物酶标记的检测抗体、显色底物和终止液。

更优选的，所述显色底物为TMB，所述终止液为2M的硫酸，所述包被抗体为杂交瘤细胞株为4G2分泌的单克隆抗体，所述检测抗体为杂交瘤细胞株4E7分泌的单克隆抗体。

4、所述单克隆抗体在制备检测CST1蛋白试剂中的应用。

优选的，所述检测CST1蛋白试剂为检测CST1蛋白过量表达或诊断以CST1蛋白异常表达的试剂。

优选的，所述检测CST1蛋白试剂的捕获抗体为杂交瘤细胞株为4G2分泌的单克隆抗体，检测抗体为杂交瘤细胞株4E7分泌的单克隆抗体。