[发明专利]一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法

权利要求书

1.一种载富勒烯人工髓核的制备方法，其特征在于：该载富勒烯人工髓核的制备方法包括以下步骤：

S1、富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶的制备：

一、壳聚糖溶液的配制：1、材料的选取：使用50 mL的广口烧杯进行浓度为0.1M的稀醋酸的量取以及使用天平进行一定量的脱乙酰度大于90%的壳聚糖粉末的称取；2、材料的混合：使用磁力搅拌机对烧杯内部量取的稀醋酸进行搅拌，并且将称取的壳聚糖粉末依次加入烧杯内部与稀醋酸进行搅拌混合，直至壳聚糖溶液的浓度为10-20 wt%后，停止搅拌混合步骤；3、材料的消毒：将混合完成后的浓度为10-20wt%的壳聚糖溶液置于高温高压灭菌锅的内部进行消毒；4、材料的存储：待消毒完成后，将壳聚糖溶液静置冷却，待冷却至室温后，将壳聚糖溶液放入冰箱内进行存储，等待下一步骤；

二、Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的选取：配制一定量浓度为0.02M的稀醋酸溶液以及量取一定量的无菌Ⅱ型胶原；2、材料的消毒：使用滤膜将配制好的稀醋酸溶液进行过滤消毒；3、材料的混合：将无菌Ⅱ型胶原依次加入配制好的稀醋酸溶液内，同时进行缓慢搅拌混合，二者溶解混合成为Ⅱ型胶原溶液，待混合后的溶液胶原浓度为2.5-5 mg/mL后，停止搅拌，其中Ⅱ型胶原溶液的配制中的1-3步骤均在超净台中进行；4、材料的存储：将搅拌混合所得到的胶原浓度为2.5-5 mg/mL的Ⅱ型胶原溶液进行封口后，放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；

三、β-甘油磷酸钠溶液的配制：1、材料的选取：取一定量的β-甘油磷酸钠粉末，将其逐步加入到超纯水中进行溶解，直至β-甘油磷酸钠溶液的浓度为50wt%即可；2、材料的消毒：使用滤膜对溶解获得的浓度为50 wt%的β-甘油磷酸钠溶液进行过滤消毒；3、材料的存储：将过滤消毒后的β-甘油磷酸钠溶液放置于恒温冰箱内部，进行存储，等待下一步骤；

四、富勒烯/羟乙基纤维素溶液的配制：1、材料的选取：取适量的羟乙基纤维素、富勒烯以及PBS溶液；2、材料的混合：将羟乙基纤维素逐步加入至PBS溶液内部进行溶解混合，形成羟乙基纤维素溶液，羟乙基纤维素溶液的浓度为10-50 mg/mL；3、材料的消毒：使用滤膜对羟乙基纤维素溶液进行过滤消毒；4、材料的二次混合：将富勒烯加入至羟乙基纤维素溶液中进行二次混合；5、材料的存储：将二次混合后获得的富勒烯/羟乙基纤维素溶液放置在恒温冰箱内进行存储，等待下一步骤；

五、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的混合：将步骤一中配制好的无菌壳聚糖溶液与步骤二中配制好的Ⅱ型胶原溶液按照2:1的体积比例加入无菌烧杯中，然后将烧杯置于冰上，进行搅拌混合，其中搅拌混合时长为10分钟；2、材料的存储：将搅拌混合后的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液进行封口，然后放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；

六、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、β-甘油磷酸钠溶液以及富勒烯/羟乙基纤维素溶液的混合：1、材料的混合：将步骤五中的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、步骤三中的β-甘油磷酸钠溶液以及步骤四中的富勒烯/羟乙基纤维素溶液置于超净台内部，其中壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液置于冰上进行搅拌，然后将配置好的无菌β-甘油磷酸钠溶液逐步缓慢加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液内，进行混合，获得浓度为4-15 wt%的壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液，然后将富勒烯/羟乙基纤维素溶液加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠溶液的内部进行混合，将壳聚糖/Ⅱ型胶原/β-甘油磷酸钠/富勒烯/羟乙基纤维素的混合溶液置于温度为37℃的恒温水浴锅内，进行溶液的升温，待混合溶液呈凝胶状态后，置于冰箱内部进行冷冻干燥，从而获得富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶，其中冰箱的温度为-80℃，冷冻干燥时长为4小时;

S2、富勒烯聚氨酯静电纺丝膜的制备：

1、材料的选取：量取适量的聚氨酯、六氟异丙醇溶剂以及富勒烯，其中富勒烯的重量为聚氨酯重量的1~10％；2、材料的混合：将聚氨酯加入至六氟异丙醇溶剂内进行溶解混合，形成重量百分比为10~20％的溶液，然后将富勒烯加入至混合溶液内，进行二次混合；3、材料的成膜：将二次混合后的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂注入至静电纺丝装置内，进行静电纺丝，从而获得聚氨酯纳米纤维膜，其中静电纺丝装置的电压为20~30 kV、喷丝头溶液流量为0.1~10 mL/h及接收距离为10~20 cm，其中聚氨酯纳米纤维膜的纤维直径为100~500nm；4、材料的成型：将静电纺丝后的聚氨酯纳米纤维膜进行冷冻干燥及真空干燥；其中静电纺丝的过程：（1）溶液的注入：将富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂置于注射器的内部，且通过其推进器进行推动，直至液滴稳定流下后，调高推进器电压；（2）丝膜的接收：使用滚轴进行聚氨酯纳米纤维膜的接收，通过滚轴滚动进行纺丝过程中的聚氨酯纳米纤维膜的持续接收，从而形成完整的聚氨酯纳米纤维膜，其中滚轴为不锈钢材质构成;

S3、载富勒烯人工髓核的制备：一、内层的处理：将S1步骤中最终获得的富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶切成若干小块；二、外层的处理：裁剪S2步骤制备的富勒烯聚氨酯静电纺丝膜，将2块富勒烯聚氨酯静电纺丝膜呈上下2层设置，二者之间留有间隔；三、载富勒烯人工髓核的成型：将步骤一中的若干小块的富勒烯/壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β-甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶放置在2层富勒烯聚氨酯静电纺丝膜之间的间隔，并通过热压装置将2层膜的边缘处进行密封，从而形成人工髓核。