[发明专利]人MMP13基因干扰序列、shRNA-MMP13病毒及其低表达细胞系

说明书

本发明公开了一种人MMP13基因干扰序列，如SEQ ID NO1所示。还公开了人shRNA‑MMP13病毒，为上述序列构建到表达质粒中。还公开了低表达MMP13蛋白的细胞系，为被上述病毒感染的软骨细胞。本发明以慢病毒为载体构建表达干扰MMP13蛋白表达的shRNA。慢病毒基因组可以整合到宿主基因组中，从而稳定表达外源基因，可在药物压力和荧光蛋白双重条件下筛选，更方便阳性克隆的筛选。在软骨细胞中低表达MMP13的稳定细胞系，可用于研究低表达MMP13引起的相关蛋白表达量变化，从而找出与ONFH发生发展相关的机理，为临床和治疗提供更多的靶点。在细胞水平上研究骨关节炎的病理发生过程，缩短实验周期，更便利地进行科学研究。

技术领域

本发明涉及人MMP13基因干扰序列、shRNA-MMP13病毒及低表达MMP13 蛋白的细胞系。

背景技术

股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)是一种常见的骨科疑难疾病。股骨头坏死以骨组织缺血坏死为特征性病理表现，进而造成股骨头塌陷变性，并最终发展成为骨性关节炎。基质金属蛋白酶-13(Matrix metalloproteinases-13，MMP13)是在骨关节炎(osteoarthritis,OA)发生发展过程中的一种关键介质。在正常滑膜组织中，其表达很低，但在骨性关节炎的滑膜中广泛表达(Matrix metalloproteinases involvementin pathologic conditions,2010)。金属基质蛋白酶家族其他亚型降解Ⅱ型胶原也需要通过MMP13起作用。而Ⅱ型胶原是构成软骨基质中最具特征性且含量最多的成分。因此在OA的疾病发展过程中，MMP13启动了早期的软骨破坏机制(Is there a role for in atrialfibrillation,2009)。正常滑膜组织中，MMPs(基质金属蛋白酶(matrixMetalloproteinases)与组织蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors ofmetalloproteinases,TIMPs)的表达呈动态平衡。在滑膜炎症时，MMPs与TIMPs 之间的平衡被打破，MMPs将会在滑膜细胞中大量表达，MMP13的表达明显增高(Matrixmetalloproteinases involvement in pathologic conditions，2010)。目前，大都通过动物模型来研究骨关节炎的病理发生过程，实验周期长，操作不方便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人MMP13基因干扰序列、shRNA-MMP13病毒及低表达MMP13蛋白的细胞系。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种人MMP13基因干扰序列，如SEQ ID NO1所示。

一种人shRNA-MMP13病毒，为权利要求1的序列构建到 pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNA质粒中，然后包装成病毒。

以及一种低表达MMP13蛋白的细胞系，为被上述shRNA-MMP13病毒感染的SW1353细胞。

优选的，所述软骨细胞为SW1353细胞系或Human Chondrocyte细胞系。