[发明专利]一种新型CpG ODN序列及其在抗黑色素瘤上的应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种新型CpG ODN序列及其在抗黑色素瘤上的应用，一种新型CpG ODN序列，该序列具有抗黑色素瘤的作用。本发明的新型CpG ODN序列表现强效的免疫刺激功能，能够有效地刺激PBMC细胞上CD86的表达，有效的抑制黑色素瘤的生长，并增加了小鼠脾脏中CD8阳性T淋巴细胞的表达，具备明显的临床应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种新型CpG ODN序列及其在抗黑色素瘤上的应用。

背景技术

DNA一直被认为仅具有较弱的免疫原性，难以引起机体的免疫反应。但近些年研究发现，人工合成的含CpG基序的脱氧寡核苷酸单链DNA(CpG ODN)能激活小鼠的NK细胞，刺激小鼠的脾细胞分泌干扰素。CpG是由胞嘧啶和鸟嘌呤通过磷酸二酯键连接成的非甲基化的二核苷酸(其中，C代表胞嘧啶，G代表鸟嘌呤，p代表磷酸二酯键)。具有免疫反应刺激能力的CpG ODN所必须具备的结构条件：(1)刺激性序列必须含有未甲基化的CpG基序，(2)CpG基序5'端为两个嘌呤核苷酸，3'端为两个嘧啶核苷酸的序列具有更强的刺激效果，(3)CpG ODN需要有一定的长度。在一个CpG ODN中，可有一个以上的CpG基序。由于序列尤其是CpG两侧的序列的不同，CpG ODN可有多种多样的形式，表现出不同的免疫调节活性，CpG基序周围的嘌呤和嘧啶核苷酸以及CpG基序间的间距等都能影响序列的免疫刺激的能力。因此，本发明设计了一种具有较强免疫原性的CpG ODN序列。

发明内容

本发明的新型CpG ODN序列表现强效的免疫刺激功能，能够有效地刺激PBMC细胞上CD86的表达，有效的抑制黑色素瘤的生长，并增加了小鼠脾脏中CD8阳性T淋巴细胞的表达，具备明显的临床应用前景。

本发明提供了一种新型CpG ODN序列，所述新型CpG ODN序列的核酸序列为：

5’-gacgcgcgtcgacgatcgcgaattcgaacgtacgct-3’。

一种上述新型CpG ODN序列在抗黑色素瘤上的应用。

优选的，所述新型CpG ODN序列应用于黑色素瘤患者PBMC细胞表面分子CD86的表达。

优选的，将所述新型CpG ODN序列制备成用于治疗黑色素瘤小鼠的药物。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明的新型CpG ODN序列表现强效的免疫刺激功能，能够有效地刺激PBMC细胞上CD86的表达，引起机体免疫反应，有效的抑制黑色素瘤的生长；增加小鼠脾脏中CD4及CD8阳性T淋巴细胞的表达，抑制小鼠黑色素瘤的生长，延长小鼠生存期，具备明显的临床应用前景。

附图说明

图1为本发明PBMC细胞表面分子CD86表达图；

图2为本发明黑色素荷瘤小鼠的生存期图；

图3为本发明黑色素荷瘤小鼠的肿瘤实物图(A)；

图4为本发明黑色素荷瘤小鼠的肿瘤重量图(B)；

图5为本发明CD4及CD8阳性T淋巴细胞表达图；

图6为本发明肿瘤组织中迁移与凋亡相关蛋白表达图；

图7为本发明小鼠血清中抗肿瘤细胞因子IFNγ含量图。

具体实施方式

下面结合附图1-7对本发明的几个具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制，实施例中涉及的试剂均能通过公共渠道获得。

实施例1

一种新型CpG ODN序列，新型CpG ODN序列的核酸序列为：