[发明专利]H7N9亚型流感病毒重组蛋白及病毒疫苗

说明书

本发明提供编码鸭源H7N9亚型流感病毒HA的重组表达载体，生产重组蛋白的方法以及应用重组蛋白的方法。重组表达的H7HA具有良好的生物活性，为禽流感疫苗对珍稀禽类保护性研究提供了新的方法。

技术领域

本发明提供H7N9亚型流感病毒HA蛋白的重组表达载体，重组蛋白的表达方法以及使用重组蛋白的方法。

背景技术

流感病毒能够引起严重的人兽共患病，宿主范围包括禽类、哺乳动物如猪、犬、猫、虎、熊猫、牛、海豹和鲸鱼等以及人类，可引发禽流感、季节性流感疫情。自2013年年初以来，通过《国际卫生条例》报告途径获知，迄今报告了总共1564例人感染甲型H7N9禽流感病毒实验室确诊病例。

流感病毒名称中的Hx和Nx分别来自两种蛋白：表面糖蛋白血凝素(Hemagglutinin， HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)。HA蛋白有助于流感病毒结合宿主细胞，而NA蛋白则是病毒复制后从细胞出芽的必要条件。病毒内部序列有8个基因片段，8个基因之间可以重新进行组合，这一过程称之为重组(reassortment，也称为重配)。到目前为止，已经发现的A型流感病毒(Influenza A virus，IAV)包括有18种HA亚型和11种NA亚型(BodewesR,ZohariS,KrogJ S,et al.Spatiotemporal analysis of the geneticdiversity of seal influenza A(H10N7)virus，Northwestern Europe[J].J Virol,2016,90(9):4269-4277；Nayak D P,Hui E K,Barman S.Assembly and budding ofinfluenza virus[J].Virus research,2004,106(2):147-165)。

在全球范围内，禽感染H7亚型是很普遍的，但严重的人感染却很少见。H7亚型禽流感病毒可分为两个不同的基因谱系：北美谱系和欧亚谱系。

中国CDC国家流感中心(the Chinese National Influenza Center,CNIC)对H7N9禽流感病毒基因数据进行基因组比对和亲缘关系分析后发现，在H7N9病毒的8个基因片段中，H7HA片段与A/duck/Zhejiang/12/2011(H7N 3)密切相关，因此推测HA可能来源于浙江鸭群中的禽流感病毒，属于禽流感病毒欧亚谱系，并可追溯至东亚地区野鸟中分离的相似病毒；N9NA片段与A/wildbird /Korea/A14/2011(H7N9)密切相关，推测可能来源于沿着东亚候鸟迁徙途径迁徙的韩国野鸟。其余6个内部基因片段(PB2、PB1、PA、NP、M、NS) 来源于中国上海、浙江、江苏等地的鸡群中的H9N2禽流感病毒，这些病毒与北京燕雀A /brambling/Beijing/16/2012(H9N2)密切相关。中国科学院微生物研究所一个流感研究团队认为H7N9禽流感病毒可能起源于多重基因重组, 从事这种研究是为了了解这类变异有多大可能会发生自然演变并引起在人类中的大流行，包括对病毒的传播能力，以及耐药性方面的研究工作。

由H7N9流感病毒造成的人死亡病例使得有必要研制疫苗来预防H7N9流感。

目前，在流感病毒编码的蛋白中，以HA蛋白的研究最为深入，HA蛋白在决定流感病毒抗原性、病毒侵入宿主细胞等方面起作用，NA蛋白则帮助成熟的子代病毒从宿主细胞表面释放(Spackman E,Swayne D.E.Vaccination of gallinaceous poultry forH5N1highly pathogenic avian influenza: current questions and new technology[J].Virus Res.2013.178(1):121–132)。流感病毒的HA上存在抗原决定簇，抗原决定簇是一些能激发宿主产生抗流感病毒抗体的氨基酸区域，抗原决定簇内氨基酸位点发生变化可导致流感病毒的抗原性发生改变。HA蛋白是宿主获得性免疫系统识别的主要对象，因而成为疫苗研制的主要靶标。