[发明专利]用于筛选检定黄曲霉毒素B1降解菌的培养基及筛选检定方法

说明书

本发明属于微生物菌株筛选技术领域，涉及一种用于筛选检定黄曲霉毒素B1降解菌的培养基及筛选检定方法。筛选检定方法，包括培养和鉴定两个步骤，培养以香豆素为唯一碳源，经初选和纯化后得到初筛菌株，然后加入AFB₁标准品对AFB₁进行降解；鉴定采用HPLC进行测定，对土壤中是否含有用于降解黄曲霉毒素B1的菌株进行检定；该方法以香豆素为唯一碳源，对原料无污染、具有高度专一性；能够高效、简易、准确的确定土壤中是否含有用于降解黄曲霉毒素B1的菌株，降低筛选成本；同时，筛选出的菌株能够有效去除黄曲霉毒素，且避免毒素重新产生，是一种高效、安全的去毒方法。

技术领域

本发明属于微生物菌株筛选技术领域，涉及一种用于筛选检定黄曲霉毒素B1降解菌的培养基及筛选检定方法。

背景技术

黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉、寄生曲霉、集蜂曲霉、溜曲霉等真菌产生的次级代谢物，该类毒素是由二呋喃环和香豆素组成的结构类似物，具有强肝毒性、致突变性、致癌性和致畸性。黄曲霉毒素污染的范围较泛，如花生、玉米、干果、牛奶等食品，因其毒性强，越来越受到关注。我国是花生出口贸易大国，黄曲霉毒素超标是影响我国花生出口的主要问题。现在已鉴定出二十多种黄曲霉毒素，其中黄曲霉毒素B₁(AFB₁)分布范围最广，并且毒性最强。目前世界上约有一百多个国家对食品中黄曲霉毒素提出了限量要求，我国规定花生和玉米中AFB₁的最大限量为20μg/kg，欧盟所有成员国严格规定花生等食品中AFB₁的含量低于2μg/kg，黄曲霉毒素总量小于4μg/kg。因此，寻找能有效脱除花生等农产品中黄曲霉毒素的方法对保障食品安全具有重要的意义。

国内外去除AFB₁的方法主要有辐照、热处理、吸附剂脱毒等物理法，及强碱、强酸、氧化剂处理等化学法，但这些理化方法不仅成本高、效率低，且部分方法还伴有毒性物质产生。微生物脱毒法成为近年来的研究热点，该方法主要利用细菌、真菌等微生物及其代谢产物去除食品中污染的AFB₁，该脱毒法对原料无污染、具有高度专一性、同时避免毒素重新产生，因此是一种高效、安全的去毒方法。

发明内容

本发明解决的技术问题之一是，提供一种用于筛选检定黄曲霉毒素B1降解菌的培养基。

本发明解决的技术问题之二是，提供一种用于降解黄曲霉毒素B1的菌株的筛选检定方法，从而高效、简易、准确的确定土壤中是否含有用于降解黄曲霉毒素B1的菌株，降低筛选成本。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种用于筛选检定黄曲霉毒素B1降解菌的培养基，所述培养基为香豆素液体培养基和/或香豆素固体培养基，香豆素液体培养基的成分为：KH₂PO₄ 0.25g/L、MgSO₄·7H₂O0.25g/L、KNO₃ 0.5g/L、(NH₄)₂SO₄ 0.5g/L、CaCl₂ 0.005g/L、FeCl₃·6H₂O 0.003g/L、pH7.0；121℃高压灭菌20min后加入已消毒杀菌的香豆素溶液至1g/L；香豆素固体培养基的成分为：在香豆素液体培养基的基础上加入20g/L琼脂。

一种用于降解黄曲霉毒素B1的菌株的筛选检定方法，包括培养和鉴定两个步骤，培养以香豆素为唯一碳源，经初选和纯化后得到初筛菌株，然后加入AFB₁标准品对AFB₁进行降解；鉴定采用HPLC进行测定，对土壤中是否含有用于降解黄曲霉毒素B1的菌株进行检定；

所述初筛菌株的培养过程包括：

步骤一：采集花生主产区的土壤样品保存备用；