[发明专利]产L-乳酸重组基因工程菌的固定化及其应用在审
申请号: | 201810376486.7 | 申请日: | 2018-04-25 |
公开(公告)号: | CN108486092A | 公开(公告)日: | 2018-09-04 |
发明(设计)人: | 胡晓;马明超;胡曼曼;李明同;安明;孙永先;王玉成;王理想 | 申请(专利权)人: | 安徽瑞赛生化科技有限公司 |
主分类号: | C12N11/02 | 分类号: | C12N11/02;C12N1/21;C12P7/56;C12R1/19 |
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地址: | 235058 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 重组基因工程菌 超分子自组装 乳酸 葡萄糖转化率 产物表达 固定化 制备 十六烷基三甲基溴化胺 乳酸脱氢酶基因 酵母菌 大肠杆菌表达 限制性培养基 葡萄糖 物理吸附法 三氯化铝 重复利用 重组DNA 基因 工程菌 光滑球 硅酸钠 氯化铵 构建 修饰 整合 发酵 应用 合成 | ||
1.本发明涉及产L-乳酸重组基因工程菌的固定化及其应用,其特征在于超分子自组装模板固定产L-乳酸重组基因工程菌。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于将硅酸钠、十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)、氯化铵和三氯化铝在水相和超分子自组装条件下,制备的孔径为25~45nm的超大比表面积(不小于1000m2/g)的超分子自组装模板,并在酸性水溶液中结构稳定,合成物体系中各物质的摩尔比为SiO2:CTAB:AlCl3:NH4Cl:H2O=1.0:0.16~0.2:0.5~0.6:1.0~2.2:40~60。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于重组基因工程菌的构建方法如下:
(1)将乳杆菌属乳酸脱氢酶基因Idhl整合进光滑球拟酵母菌基因MTⅡa,形成重组DNA基因IdhⅡa;
(2)通过PCR克隆,并经修饰后插入大肠杆菌表达载体pTE28aT7构建L-乳酸工程菌pTE28aT7-IdhⅡa。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于将上述超分子自组装模板,采用物理吸附法来固定上述重组基因工程菌,并用于在含葡萄糖限制性培养基中发酵制备L-乳酸,发酵工艺条件为温度30℃~35℃、110r/min振荡培养48h,固定化酶可以反复使用30次以上。
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