[发明专利]一种屎肠球菌、其高密度发酵培养方法及由其制备的微生态制剂

说明书

本发明提出一种屎肠球菌、其高密度发酵方法及由其制备的微生态制剂，属于乳酸菌培养技术领域，筛选出益生性及抗逆性均显著的屎肠球菌菌株作为饲料添加剂，可有效替代部分抗生素。该技术方案提供的所述屎肠球菌Enterococcus faecium为E13‑5，保藏编号为CCTCC M2017191。本发明提供的屎肠球菌可作为安全、高效的新型饲料添加剂来部分替代抗生素使用，从而可满足现代化的饲料工业以及畜牧养殖业的需求。

技术领域

本发明属于乳酸菌培养技术领域，尤其涉及一种屎肠球菌、其高密度发 酵培养方法及由其制备的微生态制剂。

背景技术

屎肠球菌属于链球菌科、肠球菌属细菌，革兰氏阳性，兼性厌氧。其具 有优良的生物学特性，是肠道共生菌，可在肠道中形成优势菌群，由于其生 长速度快，具较好粘附力，产生乳酸以及一些抗菌物质，在许多动物新出生 的2-3天内占有优势地位，从而增加有益菌的数量，抑制有害菌，促进肠道 健康，调节肠道的微生态平衡且能防治腹泻，在提高生长性能方面有着显著 的功效，效果与抗生素相当。

屎肠球菌不仅具有良好的生物学特性，还能够提高动物体的免疫能力。 由屎肠球菌组成的益生菌制剂可以提高饲料的转化率，改善畜产品品质，降 低腹泻率以及死亡率。因此，屎肠球菌在畜禽养殖业中有着广泛的应用前景， 其微生态制剂因具有环境友好，无残留等优点被越来越多地应用于畜牧业生 产，对养殖生态环境的保护及养殖业的可持续发展具有重要的意义。

然而，现有屎肠球菌的耐热性、耐胃酸、耐胆盐及发酵性能等不能适应 日益发展的工业化需求，不能满足现代化的饲料工业以及畜牧养殖业的需求， 因此，筛选出益生性及抗逆性显著的屎肠球菌菌株成为畜牧业发展的一大瓶 颈问题。此外，抗生素的持续饲喂导致了细菌的耐药性、畜产品中的药物残 留等日益加重。益生菌作为一种无毒、无残留、无抗药性的饲料添加剂，已 成为有效的抗生素替代产品之一。因此，寻找安全、高效的新型饲料添加剂 来部分替代抗生素成为养殖业亟待解决的问题。

发明内容

本发明提出一种屎肠球菌、其高密度发酵培养方法及由其制备的微生态 制剂，筛选出益生性及抗逆性均显著的屎肠球菌菌株作为饲料添加剂，可有 效替代部分抗生素。

为了达到上述目的，本发明提供了一株屎肠球菌，所述屎肠球菌 Enterococcusfaecium为E13-5，保藏编号为CCTCC M2017191。

本发明还提供了一种如上述技术方案所述的屎肠球菌Enterococcus faeciumE13-5的高密度发酵培养方法，包括以下步骤：

一级生产种子培养：取屎肠球菌的基础种子无菌条件下接种于MRS培养 基的斜面进行纯培养，试管于37℃-40℃静置培养24-48小时，镜检合格后， 作为一级生产种子；

二级生产种子培养：取一级生产种子斜面，向菌种斜面中加入无菌生理 盐水将斜面上的菌落洗下，按照1％的接种量接种到二级种子培养液中，每瓶 的装液量为300-400mL，37℃-40℃静置培养14-16小时，镜检无杂菌，且菌 体处于分裂期，检验合格后，作为二级生产种子；

三级生产种子培养：取二级种子培养液按照5-10％的接种量接种到三级 种子培养液中，发酵温度为37℃-40℃，pH控制在7.0，搅拌转速为50r/min， 培养6-8小时，发酵过程中罐压设定为0.05mpa，当糖的含量低于0.6％，且 镜检无杂菌时，转种进行上罐发酵；

上罐发酵：取三级种子培养液按照5-10％的接种量接种到发酵培养罐中， 发酵温度为37℃-40℃，pH控制在6.5，搅拌转速为150r/min，发酵过程中 溶氧量控制在10％以上，根据溶氧加大罐压，罐压最高不超过0.1mpa；当糖 含量低于1.0％时采用流加方式进行补料，当糖含量不再降低、菌浊度不再增 加，且镜检无杂菌时，发酵培养结束。