[发明专利]一种屎肠球菌、其高密度发酵培养方法及由其制备的微生态制剂

权利要求书

1.一株屎肠球菌，其特征在于，所述屎肠球菌Enterococcus faecium为E13-5，保藏编号为CCTCC M2017191。

2.根据权利要求1所述的屎肠球菌Enterococcus faecium E13-5的高密度发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

一级生产种子培养：取屎肠球菌的基础种子无菌条件下接种于MRS培养基的斜面进行纯培养，试管于37℃-40℃静置培养24-48小时，镜检合格后，作为一级生产种子；

二级生产种子培养：取一级生产种子斜面，向菌种斜面中加入无菌生理盐水将斜面上的菌落洗下，按照1％的接种量接种到二级种子培养液中，每瓶的装液量为300-400mL，37℃-40℃静置培养14-16小时，镜检无杂菌，且菌体处于分裂期，检验合格后，作为二级生产种子；

三级生产种子培养：取二级生产种子液按照5-10％的接种量接种到三级种子培养液中，发酵温度为37℃-40℃，pH控制在7.0，搅拌转速为50r/min，培养6-8小时，发酵过程中罐压设定为0.05mpa，当糖的含量低于0.6％，且镜检无杂菌时，转种进行上罐发酵；

上罐发酵：取三级种子培养液按照5-10％的接种量接种到发酵培养罐中，发酵温度为37℃-40℃，pH控制在6.5，搅拌转速为150r/min，发酵过程中溶氧量控制在10％以上，根据溶氧加大罐压，罐压最高不超过0.1mpa；当糖含量低于1.0％时采用流加方式进行补料，当糖含量不再降低、菌浊度不再增加，且镜检无杂菌时，发酵培养结束。

3.根据权利要求2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，以质量份数计，所述二级种子培养液的配方包括1％葡萄糖、1％蛋白胨、1％酵母浸粉和4％微量盐，pH7.0；所述三级种子培养液的配方包括2％葡萄糖、1.5％蛋白胨、1.5％酵母浸粉和4％微量盐，pH7.0。

4.根据权利要求2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，以质量份数计，上罐发酵时使用的发酵培养液配方包括2％葡萄糖、2％蛋白胨、2％酵母浸粉和4％微量盐，pH7.0。

5.根据权利要求2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，上罐发酵时的补料参数控制为：糖含量控制范围为0.5-1.0％，蠕动泵的转速为120-150rpm，补料周期为100s，开度为50-60s。

6.一种以权利要求1所述的屎肠球菌Enterococcus faecium E13-5为主要原料制备得到的微生态制剂。

7.根据权利要求6所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

取预定量的屎肠球菌Enterococcus faecium E13-5在转速10000r/min条件下进行离心，得到菌泥，将菌泥与保护剂以质量比1:3的比例进行充分混合，然后进行冻干，并将冻干后的菌泥与辅料进行充分搅拌混合，得到微生态制剂。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，以质量份数计，所述保护剂包括5％蔗糖、4％山梨醇、3％脱脂奶粉、1％明胶和0.5％Vc，所述辅料包括49％淀粉、20％乳糖、15％糊精、10％聚维酮K30、5％微晶纤维素和1％氯化盐。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将与保护剂充分混合的菌泥在以下条件依次进行冻干：在-40℃预冻3-4小时，在-40℃至-45℃以下抽真空至20Pa左右，在5℃升华干燥20-24小时，在0℃升华干燥8-10小时，在25℃解析干燥4-6小时，最后关闭真空2-4小时。