[发明专利]一种固定化脂肪酶及其制备方法在审
| 申请号： | 201810362084.1 | 申请日： | 2018-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN108486094A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 胡云峰;徐珊;李任强;张继福;张云;孙爱君 | 申请（专利权）人： | 中国科学院南海海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N11/08 | 分类号： | C12N11/08 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510301 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 固定化脂肪酶 制备 磷酸钾缓冲液 酶活 酶液 环氧树脂 耐受性 脂肪酶 操作稳定性 储存稳定性 温度耐受性 澄清酶液 工业应用 固定化 抽滤 酶粉 回收率 洗涤 溶解 | ||
1.一种固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将脂肪酶溶于pH 5.5～8.5的缓冲液中，10000r/min离心得到脂肪酶酶液，按照环氧树脂：脂肪酶酶液为0.5～7g：4mL的比例将环氧树脂放入酶液中，在18～28℃条件下固定化12～24h；然后洗涤、抽滤、干燥。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的环氧树脂为环氧树脂LXEP-120、LX-1000EP、ES-1、ES-3、ES-5或ES-7。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的环氧树脂为环氧树脂LXEP-120。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲液为磷酸钾缓冲液、磷酸钠缓冲液、柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-HCl缓冲液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲液为浓度为1.0mol/L的pH6.0的磷酸钾缓冲液。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的酶液浓度为2mg/mL，环氧树脂：脂肪酶酶液的比例为5g：4mL。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的固定化温度为22℃、固定化时间为12h。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
用1.0mol/L的pH为6.0的磷酸钾缓冲液溶解脂肪酶酶粉制备浓度为2.0mg/mL的酶液，10000r/min离心12min后得到澄清酶液，按照5g：4mL的比例将型号为LXEP-120的环氧树脂置于酶液中，在150rpm、22℃条件下固定化12h，然后用1.0mol/L的pH为6.0的磷酸钾缓冲液溶洗涤3次，抽滤，于40℃干燥，得到固定化脂肪酶。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的固定化脂肪酶的制备方法制备得到的固定化脂肪酶。
10.权利要求9所述的固定化脂肪酶在催化酯类的水解、醇解、酯化、转酯化及酯类的逆向合成反应中的应用。
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